Efecto Del Ph Y Temperatura En La Transaminasa
Páginas: 9 (2247 palabras)
Publicado: 6 de mayo de 2012
EFECTO DEL pH Y DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD DE LA TRANSAMINASA
RESUMEN
Se evaluó el efecto de la temperatura y del pH sobre la actividad de la Glutamato- oxalacetato transaminasa (GOT). Para ello se extrajo la enzima de alverjas frescas, realizando una pasta de estas con Tris- HCl pH 7,5 y centrifugando durante 10 minutos. Se tomó el sobrenadante y se colocó en un baño de hielo.Luego se tomaron 0,2 mL de este extracto en varios tubos de ensayos y para medir el efecto del pH se realizó la reacción utilizando tris- HCl de pH 7 y 10 e incubando los tubos a 37 ºC durante 30 minutos. De igual forma se tomaron 0,2 mL de la enzima y se colocaron en tres tubos de ensayo incubándolos a 4, 25 y 50 ºC respectivamente, utilizando en todos como amortiguador tris- HCl de pH 7,5. Paratodos los tubos se utilizó como sustrato de la reacción L-aspartato/ 2-oxoglutarato. Transcurrido este tiempo se tomaron todos los tubos y se agregó solución ácida de 2,4 dinitrofenilhidrazina para formar un complejo coloreado y medir la absorbancia de cada uno de los tubos. Finalmente se realizó una curva de calibración con ácido Pirúvico, y con la ecuación de la recta se encontró la concentraciónen cada tubo de ensayo. Finalmente se encontró que la actividad de la enzima sufrió un incremento notable al aumentar la temperatura y el pH lo que indica que estos dos parámetros son muy importantes de controlar en los estudios que se hagan de reacciones, sobre todo de reacciones biológicas.
Palabras claves: Transaminación, GPT, GOT, transaminasa
INTRODUCCIÓN
Las Transaminasas son un tipode enzimas que se encargan de transferirle grupo amino del glutamato a muchos α-cetoácidos. La mayor parte de los aminoácidos comunes se pueden formar por transaminación.
Durante la transaminación, el grupo amino del aminoácido donador pasa al α cetoácido aceptor, con lo cual se forma el α -cetoácido del aminoácido donador y el aminoácido del α -cetoácido aceptor original.
La actividad delas enzimas y sus características se estudian en las células integras o en el tubo de ensayo. Se han desarrollado técnicas histoquímicas que permiten localizar y valorar las enzimas intracelulares en cortes histológicos. Gran parte de los conocimientos sobre las enzimas proviene de su estudio en el tubo de ensayo.
Son varios los elementos capaces de influir en la acción de las enzimas, ya seaacelerándolas o retardándolas, según sus características.
Temperatura
La elevación de la temperatura incrementa la velocidad de una reacción catalizada por enzimas. Al principio la velocidad de reacción aumenta cuando la temperatura se eleva debido al incremento de la energía cinética de la energía de las moléculas reactantes.
Sin embargo, al final, la energía cinética de la enzima excede ala barrera energética para romper los enlaces débiles de hidrogeno que conservan su estructura secundaria y terciaria.
A esta temperatura predomina la desnaturalización con pérdida precipitada de la actividad catalítica. Por tanto las enzimas muestran una temperatura óptima de acción. Los limites de actividad para la mayor parte de las enzimas tiene lugar entre los 10°C y 50°C; la temperaturaoptima para las enzimas en el cuerpo se halla alrededor de 37°C.
El factor por el cual un proceso biológico aumenta para un incremento de temperatura de 10°C es el coeficiente de temperatura o Q10. El Q10 para la mayor parte de las enzimas varía entre 1.5 y 3.
pH
La intensidad máxima de la actividad de la enzima, ocurre en el pH óptimo, con rápida disminución de la actividad a cada lado deeste valor de pH. La actividad óptima generalmente se observa entre los valores de 5 y 9.
El pH óptimo de una enzima puede guardar relación con cierta carga eléctrica de la superficie, o con condiciones optimas para la fijación de la enzima a su sustrato. Cuando hay un exceso de iones hidrogeno, las enzimas los unen a sus moléculas y ante un déficit los ceden.
Este cambio tiene una doble...
RESUMEN
Se evaluó el efecto de la temperatura y del pH sobre la actividad de la Glutamato- oxalacetato transaminasa (GOT). Para ello se extrajo la enzima de alverjas frescas, realizando una pasta de estas con Tris- HCl pH 7,5 y centrifugando durante 10 minutos. Se tomó el sobrenadante y se colocó en un baño de hielo.Luego se tomaron 0,2 mL de este extracto en varios tubos de ensayos y para medir el efecto del pH se realizó la reacción utilizando tris- HCl de pH 7 y 10 e incubando los tubos a 37 ºC durante 30 minutos. De igual forma se tomaron 0,2 mL de la enzima y se colocaron en tres tubos de ensayo incubándolos a 4, 25 y 50 ºC respectivamente, utilizando en todos como amortiguador tris- HCl de pH 7,5. Paratodos los tubos se utilizó como sustrato de la reacción L-aspartato/ 2-oxoglutarato. Transcurrido este tiempo se tomaron todos los tubos y se agregó solución ácida de 2,4 dinitrofenilhidrazina para formar un complejo coloreado y medir la absorbancia de cada uno de los tubos. Finalmente se realizó una curva de calibración con ácido Pirúvico, y con la ecuación de la recta se encontró la concentraciónen cada tubo de ensayo. Finalmente se encontró que la actividad de la enzima sufrió un incremento notable al aumentar la temperatura y el pH lo que indica que estos dos parámetros son muy importantes de controlar en los estudios que se hagan de reacciones, sobre todo de reacciones biológicas.
Palabras claves: Transaminación, GPT, GOT, transaminasa
INTRODUCCIÓN
Las Transaminasas son un tipode enzimas que se encargan de transferirle grupo amino del glutamato a muchos α-cetoácidos. La mayor parte de los aminoácidos comunes se pueden formar por transaminación.
Durante la transaminación, el grupo amino del aminoácido donador pasa al α cetoácido aceptor, con lo cual se forma el α -cetoácido del aminoácido donador y el aminoácido del α -cetoácido aceptor original.
La actividad delas enzimas y sus características se estudian en las células integras o en el tubo de ensayo. Se han desarrollado técnicas histoquímicas que permiten localizar y valorar las enzimas intracelulares en cortes histológicos. Gran parte de los conocimientos sobre las enzimas proviene de su estudio en el tubo de ensayo.
Son varios los elementos capaces de influir en la acción de las enzimas, ya seaacelerándolas o retardándolas, según sus características.
Temperatura
La elevación de la temperatura incrementa la velocidad de una reacción catalizada por enzimas. Al principio la velocidad de reacción aumenta cuando la temperatura se eleva debido al incremento de la energía cinética de la energía de las moléculas reactantes.
Sin embargo, al final, la energía cinética de la enzima excede ala barrera energética para romper los enlaces débiles de hidrogeno que conservan su estructura secundaria y terciaria.
A esta temperatura predomina la desnaturalización con pérdida precipitada de la actividad catalítica. Por tanto las enzimas muestran una temperatura óptima de acción. Los limites de actividad para la mayor parte de las enzimas tiene lugar entre los 10°C y 50°C; la temperaturaoptima para las enzimas en el cuerpo se halla alrededor de 37°C.
El factor por el cual un proceso biológico aumenta para un incremento de temperatura de 10°C es el coeficiente de temperatura o Q10. El Q10 para la mayor parte de las enzimas varía entre 1.5 y 3.
pH
La intensidad máxima de la actividad de la enzima, ocurre en el pH óptimo, con rápida disminución de la actividad a cada lado deeste valor de pH. La actividad óptima generalmente se observa entre los valores de 5 y 9.
El pH óptimo de una enzima puede guardar relación con cierta carga eléctrica de la superficie, o con condiciones optimas para la fijación de la enzima a su sustrato. Cuando hay un exceso de iones hidrogeno, las enzimas los unen a sus moléculas y ante un déficit los ceden.
Este cambio tiene una doble...
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