Electroforeis

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Electroforesis
Extracción del DNA
– Crecimiento del microorganismo.
– Lisis.
– Purificación del DNA.
CRECIMIENTO
• Extracción de DNA bacteriano:
– Colonias jóvenes.
– Crecimiento en medio liquido o medio sólido.
• Extracción de DNA de eucariotes.
– Los hongos se crecen en medio liquido.
– En plantas se toman muestras de campo.
– En animales se toman biopsias.
Procedimiento general
•Rompimiento celular
– detergente, enzima, maceración física.
• Lavado con fenol-cloroformo.
• Precipitación del DNA.
• Disolver en agua y lavar para remover
sales.
• Tratar con Rnasas.
La electroforesis es una técnica para la separación de moléculas según la movilidad de estas en un campo eléctrico a través de una matriz porosa, la cual finalmente las separa por tamaños moleculares y cargaeléctrica.

acidos nucleicos
Son moléculas de mayor tamaño: Lo que implica que el tamaño de poro que nos da la acrilamida puede ser demasiado pequeño.
Presenta gran cantidad de conformaciones y de tamaños
no hace falta el SDS para conferir la misma relación carga/masa es todas las moléculas , ya que en los ácidos nucleicos la parte que confiere la carga es el grupo fosfato, y está presentede forma regular en la estructura.
Agarosa: El gel se encuentra sumergido en un electrolito tamponado con Tris-Borato (no glicina), para garantizar que los ácido nucleico estén cargados negativamente; por esto a la técnica se le denomina electroforesis de inmersión. Las moléculas migrarán hacia el polo positivo, de modo que viajarán en esa dirección por el gel, separándose por tamaño
Paravisualizar las bandas, hay que teñir el gel o marcar radiactivamente las moléculas. El método más utilizado en geles de agarosa es el del BrEt (bromuro de etidio), Se comporta como un agente intercalante, de modo que, además de disminuir la densidad de la molécula, tiene la capacidad de emitir luz cuando se le excita con luz ultravioleta. Para evitar la difusión que se producía durante la incubación, seañade el BrEt tanto en la agarosa como en el electrolito, de modo que, puedes parar la electroforesis y visualizar las bandas en la lámpara, y si es necesario continuar corriendo el gel sin ningún problema.
Instrumentos gel agarosa: Una cámara de electroforesis y fuente de alimentación, Gel bandejas de fundición, Electrophoresis buffer, Loading buffer, El bromuro de etidio, TransilluminatorFenómenos que alteran 
Uno de los fenómenos que más se producen es el denominado de inversión de banda, debido a la tendencia de los fragmentos de tamaño medio de DNA a formar horquillas, lo que hace que queden retenidos en los poros el gel más tiempo del necesario
AUTORRADIOGRAFÍA
Se añaden Anticueros radiactivos contra una proteína o sondas radioactivas de ácidos nucleicos (con secuenciaconocida). Se espera a que reaccionen (A). Se coloca la membrana de nitrocelulosa sobre una placa fotográfica y se revela
Campo pulsado
Se cambiando la dirección y/o el sentido del vector campo eléctrico en forma de pulsos. Con eso, haríamos que la molécula fuera cambiando de dirección y/o el sentido de la migración sacándola de los “atolladeros y, por tanto, haciendo que se mueva
Geles de acrilamidaLos geles de poliacrilamida constituyen un excelente medio de soporte para separaciones electroforéticas, dado que reúnen una serie de propiedades idóneas:
transparencia, elasticidad, porosidad controlable y compatibilidad con una gran variedad de compuestos químicos

Geles PAGE (electroforesis en gel de poliacrilamida): En estas condiciones el DNA permanece desnaturalizado y en forma demonohebra, de modo, que se pueden llegar a separar moléculas que difieran en un solo nucleótido.
Geles de retardo: Para averiguar la posible interacción de proteínas con el DNA,
Geles de Footprints o Fingerprints: averigua exactamente que bases interaccionan con la proteína. Para ello hacemos que la proteína este unida al DNA y añadimos DNAasa I 
Migración de los fragmentos de ADN
Las...
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