electroforesis capilar
Páginas: 7 (1656 palabras)
Publicado: 4 de febrero de 2015
ELECTROQUÍMICA ANALÍTICA Y CROMATOGRAFÍA
ELECTROFORESIS CAPILAR
Para entrar de lleno y extendernos sobre el tema de electroforesis capilar primeramente debemos tener un conocimiento básico sobre el concepto o definición del tema electroforesis.
ELECTROFORESIS:
La mayoría de las biomoléculas poseen una carga eléctrica, cuya magnitud depende del pH del medio en el que se encuentran.Como consecuencia, se desplazan cuando se ven sometidas a un campo eléctrico.
Se denomina electroforesis a la técnica mediante la cual se separan las biomoléculas en disolución cuando se ven sometidas a un campo eléctrico.
La separación puede realizarse sobre la superficie hidratada de un soporte sólido (p. ej., electroforesis en papel o en acetato de celulosa), a través de una matriz porosa(electroforesis en gel), o bien en disolución (electroforesis libre). Dependiendo de la técnica que se use, la separación obedece en distinta medida a la carga eléctrica de las moléculas y a su masa.
Se trata de una técnica fundamentalmente analítica, aunque también se puede realizar con fines preparativos.
Cada molécula se desplaza por efecto del campo, alcanzando rápidamente una velocidad constanteal equilibrarse la fuerza impulsora (fuerza del campo eléctrico) con la resistencia al avance (fuerza de fricción o rozamiento) impuesta por el medio en el que se desplaza.
La electroforesis se usa en una gran mayoría en la materia del ADN recombinante ya que nos permite saber la carga que poseen los polipéptidos, y separar los diferentes polipéptidos resultantes de las variaciones delexperimento del ADN recombinante. La variante de uso más común para el análisis de mezclas de proteínas o de ácidos nucleicos utiliza como soporte un gel, habitualmente de agarosa o de poliacrilamida. Los ácidos nucleicos ya disponen de una carga eléctrica negativa, que los dirigirá al polo positivo, mientras que las proteínas se cargan al unirse con sustancias como el SDS (detergente) que incorpora cargasnegativas de una manera dependiente de la masa molecular de la proteína. Al poner la mezcla de moléculas y aplicar un campo eléctrico, éstas se moverán y deberán ir pasando por la malla del gel (una red tridimensional de fibras cruzadas), por lo que las pequeñas se moverán mejor, más rápidamente. Así, las más pequeñas avanzarán más y las más grandes quedarán cerca del lugar de partida.ELECTROFORESIS CAPILAR
La electroforesis capilar (EC) es una técnica analítica que permite la separación y cuantificación de una amplia gama de analitos (iones, péptidos, proteínas, carbohidratos, esteroides, ácidos nucleicos, vitaminas, fármacos, células, etcétera).
EVOLUCIÓN HISTÓRICA
REUSS (1809) describe el fenómeno Elektro = electricidad y phoresis = acción dellevar.
TISELIUS (1930), Uso de Electroforesis en disolución libre en tubos verticales en forma de U
MARTIN & EVERAERTS (1967)
Electroforesis en tubos abiertos de vidrio y rellenos con hidroximetilcelulosa
HJERTEN (1967)
Electroforesis en tubos de 3.0 mm
VIRTANEN (1969)
Electroforesis en tubos de 200 y 500 μm
JORGENSON (1981)
Electroforesis Capilar. Columnas de 75 μm
y utilización deelevados voltajes
ACTUALIDAD
Este tipo de separación asocia la electromigración de los iones, propio de la electroforesis, y los efectos de separación entre fases presentes en la cromatografía. La técnica consiste en la utilización de un capilar relleno con una fase estacionaria, cuyo papel es doble: actúa como material selectivo que debe, por otro lado, participar en la migración delelectrolito.
CARACTERÍSTICAS GENERALES
La electroforesis capilar en zona (CZE) es la modalidad más utilizada a causa de su simplicidad operacional y versatilidad. El intervalo de aplicaciones de la CZE es diverso y las áreas de aplicación pueden ir desde problemas relacionados con la separación de especies pequeñas hasta la separación de especies de gran volumen. Esto, junto con el hecho que se...
ELECTROFORESIS CAPILAR
Para entrar de lleno y extendernos sobre el tema de electroforesis capilar primeramente debemos tener un conocimiento básico sobre el concepto o definición del tema electroforesis.
ELECTROFORESIS:
La mayoría de las biomoléculas poseen una carga eléctrica, cuya magnitud depende del pH del medio en el que se encuentran.Como consecuencia, se desplazan cuando se ven sometidas a un campo eléctrico.
Se denomina electroforesis a la técnica mediante la cual se separan las biomoléculas en disolución cuando se ven sometidas a un campo eléctrico.
La separación puede realizarse sobre la superficie hidratada de un soporte sólido (p. ej., electroforesis en papel o en acetato de celulosa), a través de una matriz porosa(electroforesis en gel), o bien en disolución (electroforesis libre). Dependiendo de la técnica que se use, la separación obedece en distinta medida a la carga eléctrica de las moléculas y a su masa.
Se trata de una técnica fundamentalmente analítica, aunque también se puede realizar con fines preparativos.
Cada molécula se desplaza por efecto del campo, alcanzando rápidamente una velocidad constanteal equilibrarse la fuerza impulsora (fuerza del campo eléctrico) con la resistencia al avance (fuerza de fricción o rozamiento) impuesta por el medio en el que se desplaza.
La electroforesis se usa en una gran mayoría en la materia del ADN recombinante ya que nos permite saber la carga que poseen los polipéptidos, y separar los diferentes polipéptidos resultantes de las variaciones delexperimento del ADN recombinante. La variante de uso más común para el análisis de mezclas de proteínas o de ácidos nucleicos utiliza como soporte un gel, habitualmente de agarosa o de poliacrilamida. Los ácidos nucleicos ya disponen de una carga eléctrica negativa, que los dirigirá al polo positivo, mientras que las proteínas se cargan al unirse con sustancias como el SDS (detergente) que incorpora cargasnegativas de una manera dependiente de la masa molecular de la proteína. Al poner la mezcla de moléculas y aplicar un campo eléctrico, éstas se moverán y deberán ir pasando por la malla del gel (una red tridimensional de fibras cruzadas), por lo que las pequeñas se moverán mejor, más rápidamente. Así, las más pequeñas avanzarán más y las más grandes quedarán cerca del lugar de partida.ELECTROFORESIS CAPILAR
La electroforesis capilar (EC) es una técnica analítica que permite la separación y cuantificación de una amplia gama de analitos (iones, péptidos, proteínas, carbohidratos, esteroides, ácidos nucleicos, vitaminas, fármacos, células, etcétera).
EVOLUCIÓN HISTÓRICA
REUSS (1809) describe el fenómeno Elektro = electricidad y phoresis = acción dellevar.
TISELIUS (1930), Uso de Electroforesis en disolución libre en tubos verticales en forma de U
MARTIN & EVERAERTS (1967)
Electroforesis en tubos abiertos de vidrio y rellenos con hidroximetilcelulosa
HJERTEN (1967)
Electroforesis en tubos de 3.0 mm
VIRTANEN (1969)
Electroforesis en tubos de 200 y 500 μm
JORGENSON (1981)
Electroforesis Capilar. Columnas de 75 μm
y utilización deelevados voltajes
ACTUALIDAD
Este tipo de separación asocia la electromigración de los iones, propio de la electroforesis, y los efectos de separación entre fases presentes en la cromatografía. La técnica consiste en la utilización de un capilar relleno con una fase estacionaria, cuyo papel es doble: actúa como material selectivo que debe, por otro lado, participar en la migración delelectrolito.
CARACTERÍSTICAS GENERALES
La electroforesis capilar en zona (CZE) es la modalidad más utilizada a causa de su simplicidad operacional y versatilidad. El intervalo de aplicaciones de la CZE es diverso y las áreas de aplicación pueden ir desde problemas relacionados con la separación de especies pequeñas hasta la separación de especies de gran volumen. Esto, junto con el hecho que se...
Leer documento completo
Regístrate para leer el documento completo.