Electroforesis capilar

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La electroforesis se refiere a la migración de proteínas, coloides, moléculas u otras partículas cargadas eléctricamente cuando se disuelven o suspenden en un electrolito a través del cual se hace pasar una corriente eléctrica.Según el tipo de aparato utilizado, los métodos electroforéticos pueden dividirse en dos categorías: la primera recibe el nombre de solución libre o de frentemóvil y la segunda recibe el nombre de electroforesis de zona.
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La electroforesis es un método de gran alcance que se desarrolló mucho antes de la biología molecular llegó a existir. El principio detrás de la electroforesis es que las moléculas cargadas migrarán hacia el polo opuesto y separado unos de otros sobre la base de las características físicas. En otras palabras la electroforesis serefiere a la migración de especies cargadas eléctricamente cuando se las disuelve o suspende en un electrolito a través del cual pasa una corriente eléctrica. Los cationes migran hacia el electrodo cargado negativamente (cátodo) mientras que los aniones son atraídos hacia el electrodo cargado positivamente (ánodo). Las partículas neutras no son atraídas hacia ninguno de los electrodos.

Segúnel tipo de aparato utilizado, los métodos electroforéticos pueden dividirse en dos categorías:
❖ Solución libre o de frente móvil y
❖ Electroforesis de zona
El uso de capilares como un canal de migración en la electroforesis ha permitido a los analistas realizar separaciones electroforéticas a un nivel instrumental comparable al de la cromatografía líquida de alta resolución(HPLC), aunque con algunas diferencias operativas, ventajas y desventajas en relación con la HPLC. Durante una típica operación de CE con un capilar sin recubrimiento, relleno con una solución amortiguadora conocida como ‘‘solución amortiguadora operativa’’, los grupos silanol presentes en la pared interna de los capilares de vidrio liberan iones hidrogeno a la solución amortiguadora y la superficie dela pared se carga negativamente, incluso a un pH bastante bajo. Los cationes, o los solutos que en el medio posean cargas positivas parciales, son atraídos electrostáticamente a la pared negativamente cargada formando una capa doble eléctrica. Al inicio de la electroforesis, la aplicación de un voltaje a través de toda la longitud del capilar causa que la porción de la solución de la doble capaeléctrica migre hacia el extremo catódico del capilar, arrastrando toda la solución. Este movimiento del volumen de la solución que se produce bajo la fuerza del campo eléctrico se llama flujo electro- osmótico (EOF por sus siglas en ingles).
El grado de ionización de los grupos silanol en la pared interna del capilar depende principalmente del pH de la solución amortiguadora operativa y delos modificadores que se puedan haber agregado al electrolito. A un pH bajo, los grupos silanol suelen tener una ionización baja y el EOF es bajo. A un pH mayor, los grupos silanol se ionizan más y aumenta el EOF. En algunos casos se agregan disolventes orgánicos, como por ejemplo metanol o acetonitrilo, a la solución amortiguadora acuosa para aumentar la solubilidad del soluto y de otros aditivoso para afectar el grado de ionización de la muestra. El agregado de tales modificadores orgánicos suele causar una disminución del EOF. El detector esta´ ubicado en el extremo catódico del capilar. Por lo general, el EOF es mayor que la movilidad electroforética; por lo tanto, incluso los aniones son trasladados hacia el cátodo y el detector. Cuando se emplea un capilar no recubierto que contieneuna solución amortiguadora de fosfato de pH 7,0.
El orden usual de aparición de los solutos en un electroferograma es el siguiente:
❖ Especies catiónicas.
❖ solutos neutros y
❖ especies aniónicas.

En la actualidad existen cinco modalidades principales de operación de CE:
❖ La electroforesis capilar de zona (CZE), también conocida como electroforesis capilar de...