electroforesis capilar

Electroforesis capilar
Química analítica instrumental

Definición
 Electroforesis:

Se define como el
movimiento o desplazamiento diferencial
de especies cargadas por atracción o
repulsión en un campo eléctrico.
 Electroforesis capilar: Es el empleo de
capilares para la separación de
sustancias cargadas eléctricamente.

Equipo para Electroforesis Capilar

Esquema de funcionamiento

EsquemaPartes de equipo
 Termostatizador.
 Fuente

de poder.
 Capilar de sílica.
 Electrodos.
 Detector.

Termostatización
 Método

Peltier: Es un controlador
termoeléctrico que permite el análisis y
la medición de muestras a temperatura
constante.

 Rango

de trabajo: 15 a 55° C

Fuente de Alto poder

Capilares
 Están

compuestos de sílica fundida.
 Recubiertos de una película depoliamidas.
 Diámetro interno: de 25 a 75 μm
 Longitud de 50 a 100 cm.
 Sobre la superficie del capilar se
adsorben las especies iónicas

Capilares

Electrodos
Los electrodos suelen ser de platino,
carbón o teflón y están el contacto con los
reservorios de Buffer junto con los
capilares.


Fase Normal: Polaridad (+), el ánodo se
encuentra el extremo del capilar donde se
inyecta la muestra.
Detectores
 UV-

visible con diodos (más utilizado)
 Fluorescencia (muy sensible)
 Fluorescencia inducida por láser (costoso)
 Potenciómetro (requiere electrodo selectivo)
 Amperometria (Sensible y especifico)
 Espectroscopia de masas (muy costoso)

Detector de diodos

Conceptos teóricos
 La

separación se basa en la diferencia de
velocidad de los solutos en un campo eléctrico:
V= μe. E

μe:movilidad de un ión

 Existe
 μe=

una relación Volts/cm.

Cte.= q E
6πŋr

q: carga ionica
ŋ: Viscosidad de la solución
r: radio ionico
E: campo electrico

Principio de separación
 Flujo

electro osmótico
 Fase Normal de trabajo ( polo +)
 Movimiento del flujo: (+) ----- (-)
 Soluciones amortiguadoras básicas
 Contiene grupos silanoles
 Aplicación de diferencia de potencial
 Migración delos distintos iones

Principio de separación
Moléculas de sílica transformadas en silanoles (SiOH) en medio acuoso

Los contra iones (cationes) comienzan a migrar

Principio de separación
Flujo de cargas hacia el cátodo luego de
aplicar un campo eléctrico.

Principio de separación
Corriente electro endósmica: Componente
efector mas importante en EC.
 Se generan 2 procesos fisicoquímicos:
1.Ionización de la superficie de capilar.
2. Adsorción de espacies iónicas por el
capilar.

Polarización del capilar
 Aquí

ocurre desplazamiento iónico y la
detección

Electroforegrama
 Los

picos del electro grama son
similares a los de HPLC.

 Se

generan por: Concentración de
analitos y velocidad de migración.

Grafico

Ej. Vitaminas
hidrosolubles

Fenómeno de dispersión
 Debido

a laseparación
 Debido inyección de la muestra
 Debido a la detección
 Variación de pH
 Solapamiento de picos
 Disminución del tiempo

Debido a la separación de la
muestra
 Difusión

entre el buffer y el analito

Debido a la separación de la
muestra
 Absorción

de analitos por las cargas
negativas del capilar

Debido a la detección de la muestra
 Asimetría

de las diferentes movilidades

Debidoa la detección de la muestra

Variación de pH del buffer

Solapamiento de picos
 Movilidad

de las partículas
 Calibración del detector y capilares mal
preparados

Disminución del tiempo de corrida
 Por

variación de la temperatura

Inyección de la muestra
Inyección Hidrostática
 Por diferencia de altura entre vial de la
muestra y el buffer.

Inyección de la muestra
Inyecciónelectrocinética
 Se basa en la diferencia de potencial
entre los extremos del capilar.
 Se Retiran del deposito el electrodo y el
capilar.
 Se aplica un potencial y la muestra pasa
al capilar por electro osmosis.
 Se colocan nuevamente en el deposito

Inyección de la muestra
Inyección Hidrodinámica
 El extremo de capilar so lo coloca en
recipiente de muestra
 Se utiliza diferencia de presión
...