Electroforesis

 ELECTROFORESIS
Es el movimiento de partículas eléctricamente cargadas a través de un gas o líquido como resultado de un campo eléctrico formado entre unos electrodos sumergidos en el medio. Esta técnica de separación que se basa en la migración diferencial de partículas, teniendo en cuenta su sentido y su velocidad; estas partículas son cargadas en un campo eléctrico establecido al efecto, esdecir un gradiente de potencia.
Estas partículas cargadas pueden ser muy variadas; iones simples, complejos, macromoléculas coloidales o materia corpúsculo. Se trata de una técnica de separación en la que la interfase es liquido-sólido.

HISTORIA DE LA ELECTROFORESIS

El primer aparato para electroforesis fue desarrollado por Tiselius en 1937 donde descubrió su celda electroforetica mediantela cual pudo separar cuatro proteínas claves en el suero, en los años siguientes las separaciones electroforeticas fueron la piedra angular de gran parte de la investigación de químicos y biologos moleculares relacionada con la separacion y analisis de proteinas, polinucleotidos y otros biopolimeros; en la separacion de bacterias, microorganismos y emulciones de ule.
En la evolucion historica,despues del aparato diseñado por Tiselius, vinieron las creaciones de Martín & Everaerts (1967) con la electroforesis en tubos abiertos en vidrio y rellenos con hidroximetilcelulosa; y Hjerten (1967) con la electroforesis en tubos de 3.0 mm; mas tarde (1969) Virtanen trabajo con la electroforesis en tubos de 200 y 500 m; (1981) Jorgenson implementa la electroforesis capilar, columnas de 75 m yutilización de elevados voltajes.

CLASES DE ELECTROFORESIS

Electroforesis capilar: es una poderosa técnica analítica moderna para la separacion de pequeñas y grandes moléculas, tiene varias ventajas como su alta eficiencia en la separacion, tiempo rápido de analisis y compatibilidad con pequeñas cantidades de muestra.

Electroforesis en papel: el soporte utilizado en este caso es un papelque está introducido en una disolución acuosa tamponada. La muestra se sitúa en un punto determinado del soporte. Un potencial de corriente continua (100-1000 v) es aplicado durante la separacion. Las corrientes iónicas migran hacia puntos específicos del soporte y despues e un tiempo apropiado para la separacion el soporte es retirado y secado. En caso de ser necesario el papel es tratado con unagente colorante con el fin de observar las bandas de desplazamiento.

Electroforesis capilar de geles: combinación de la electroforesis en gel con la instrumentación y principios de la electroforesis capilar. La separacion se basa en la diferencia de tamaños y cargas. Por la misma relación carga/tamaño, la separacion esta basada únicamente en el tamaño. Es aplicada a la separacion de grandesbiomoleculas, como fragmentos de DNA.

Electroforesis capilar de zona: Un tubo capilar se rellena de una disolución tampón, la muestra es cargada en una de los extremos del tubo capilar, tras esto se coloca de nuevo la columna en sendos viales que contienen el mismo tampón y se aplica el campo eléctrico. Normalmente la muestra se sitúa en el ánodo y los solutos migran hacia el cátodo.Generalmente los cátodos migran primero, siendo más rápidos los que tienen mayor carga y menor tamaño y los últimos de menor carga y mayor tamaño. Los elementos neutros aparecen englobados en una sola señal. Los aniones son los últimos, su orden es el contrario de los cationes.

Electroforesis en gel: es la más poderosa y la convencionalmente usada técnica utilizada para la separacion de macromoléculas.Los geles mas comunes son se poliacrilamida y agarosa que tienen poros con dimensiones que pueden ser determinadas. Así la separacion esta basada tanto en la filtración en gel como en las movilidades electroforeticas a ser separadas.
En la electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE), el gel esta compuesto por acrilamida y biacrilamida y un buffer a elección. La polimerización de estos...