Electroforesis

Introducción:
La electroforesis es una técnica para la separación de moléculas (proteínas o ácidos nucleicos) según la movilidad de estas en un campo eléctrico a través de una matriz porosa, la cual finalmente las separa por tamaños moleculares y carga eléctrica, dependiendo de la técnica que se use.
Los ácidos nucleicos ya disponen de una carga eléctrica negativa, que los dirigirá al polopositivo, mientras que las proteínas se cargan con sustancias como el SDS que incorpora cargas negativas de una manera dependiente del peso molecular. Para la separación se usa un gel de agarosa o poliacrilamida (fibras cruzadas). Al poner la mezcla de moléculas y aplicar un campo eléctrico, éstas se moverán y deberán ir pasando por la malla, por la que las pequeñas se moverán mejor, más rápidamente.Así, las más pequeñas avanzarán más y las más grandes quedarán cerca del lugar de partida. La gran mayoría de macromoléculas están cargadas eléctricamente, y al igual que los electrolitos estas se pueden clasificar entre fuertes y débiles dependiendo de la constante de ionización de grupos ácidos y básicos.
En general la electroforesis depende directamente del campo eléctrico y este depende dedistintos parámetros. Con base en al ley de Ohm se tiene que
V = IR
Diferencia de potencial (V) : Define el campo eléctrico y es directamente proporcional a la velocidad.
Resistencia (R): Es inversamente proporcional a la movilidad molecular.
Intensidad (I) : Cuantifica el flujo de carga eléctrica, se relaciona directamente con la distancia recorrida por las moléculas.
La electroforesis en geles un grupo de técnicas empleadas por los científicos para separar moléculas basándose en propiedades como el tamaño, la forma o el punto isoeléctrico. La electroforesis en gel se utiliza generalmente con propósitos analíticos, pero puede ser una técnica preparativa para purificar moléculas parcialmente antes de aplicar espectrometría de masas, PCR, clonación o secuenciación de ADN.
En muchoscasos un gel es un polímero entrelazado de porosidad controlable. Cuando la separación es de proteínas, ADN o ácidos nucleicos pequeños (ADN, ARN o ribonucleótidos), el gel está compuesto por diferentes concentraciones de acrilamida/bis-acrilamida y un iniciador de la polimerización, para producir redes de poliacrilamida de diferentes tamaños. Para separar ácidos nucleicos grandes, la matrizempleada es agarosa purificada. En ambos casos, el gel forma una matriz sólida pero porosa. La acrilamida, en contraste con la poliacrilamida, es una neurotoxina y debe ser manejada cuidadosamente para evitar envenenamientos.
La primera parte del nombre, electroforesis, se refiere a la fuerza electromotriz que es empleada para desplazar las moléculas a través del gel. Al situar las moléculas en el gel yaplicar una diferencia de potencial eléctrico, las moléculas se mueven a diferentes velocidades, hacia el cátodo, si están cargadas positivamente, y hacia el ánodo, si están cargadas negativamente (en una electroforesis, los electrodos se comportan igual que en una cubeta electrolítica).
Ácidos nucleicos
En los ácidos nucleicos la dirección de migración es del electrodo negativo al positivo, yesto es debido a la carga negativa presente en el esqueleto azúcar-fosfato. En los fragmentos de ADN dobles (con estructura de doble hélice) la velocidad de migración es inversamente proporcional a su tamaño. En fragmentos simples de ADN y ARN, dichas moléculas tienden a plegarse de forma compleja y a migrar de forma más complicada, según la estructura terciaria formada tras el plegamiento. Sinembargo, compuestos que puedan romper los enlaces de puente de hidrógeno, como el hidróxido de sodio o la formamida, son empleados para 'desplegar' las moléculas plegadas y permitir que la velocidad de migración dependa únicamente del tamaño y no de la estructura formada tras el plegamiento.
Proteínas
Por otra parte, las proteínas no tienen una estructura predecible como los ácidos nucleicos,...