Electroforesis

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| Universidad Nacional Autónoma de MéxicoFacultad de CienciasLicenciatura en BiologíaColegio de químicaSemestre 2010-I | |

Practica 4 electroforesis de proteínas
Equipo 1

¿Qué es la electroforesis y cuáles son sus usos?

La electroforesis es útil para el análisis y la separación de proteínas. El prototipo de todos los métodos modernos es la electroforesis libre o de frente móvil,desarrollada en primer lugar, por A Tiselius, en Suecia, en los años 1930. La movilidad (m) expresada en cm por Volt-s de una molécula en un campo eléctrico, viene dada por la velocidad de emigración V expresada en cm/s, respecto de la fuerza del campo eléctrico E, expresada en voltios/cm. m= V/E (1)

El fundamento de la electroforesis libre se puede estudiar por medio de un aparato (Tiselius)que consta de un tubo en U en cuyos extremos se colocan los electrodos correspondientes. En este tubo se coloca una solución de la proteína en una solución amortiguadora a un pH determinado. El experimento se lleva a cabo a bajas temperaturas (0°C) para impedir las corrientes de convección que pueden perturbar la movilidad de las proteínas. Como la mayor parte de la proteínas son incoloras, losaparatos de electroforesis contienen un sistema de registro, basado habitualmente en la diferencia de refracción entre la capa de proteína que se mueve en el interior del tubo en U y la solución amortiguadora que forma el límite con la proteína, límite al cual se le da el nombre de frontera. (2)

Mientras mayor sea la concentración de proteínas que se desplaza, mayor será la inclinación en elrayo de luz refractado por la frontera que se desplaza; por lo tanto, no sólo se obtienen datos sobre la movilidad propia, mayor o menor, de cada proteína sino que, además, se recoge un dato cuantitativo sobre las proporciones relativas de cada proteína en cada una de las fracciones en movimiento. Cuando se trata de una solución formada por una sola proteína el diagrama electroforético mostrará unasola frontera desplazada, tanto en la rama ascendente del tubo en U como en la rama descendente. En un diagrama electroforético es de observación frecuente el hallazgo de que los picos ascendentes son mucho más altos y más agudos que los descendentes; sin embargo la superficie de ambos es la misma, lo cual se interpreta en el sentido de que la proporción de proteína en ambas ramas es idéntica. (2)Cuando la solución contienen dos proteínas de carga eléctrica distinta, a un pH determinado, las proteínas se dirigirán hacia el electrodo correspondiente con distintas velocidades y por lo tanto el diagrama electroforético mostrará dos picos. Y si hay más de dos proteínas en la solución se observarán tantos picos como proteínas diferentes existan, siempre que su carga neta sea diferente. Porlo tanto, es posible encontrar dos proteínas distintas que tengan la misma carga eléctrica neta a un determinado pH que, por lo mismo, muestran la misma velocidad de migración electroforética; a menudo es posible separar las diversas especies químicas diferentes que emigran en un solo pico. (2)

El aparato de electroforesis no proporciona datos cuantitativos absolutos sobre la concentración o lacantidad total de proteínas en una solución; en efecto, para conocer este dato es preciso practicar la determinación de proteínas por uno de los métodos convencionales, como el de Kjeldahl. En el aparato de electroforesis se puede determinar sólo la proporcionalidad de cada una de las fracciones comprendidas en la totalidad de la solución. (2)


Durantemuchos años, la electroforesis de frente móvil o libre ha constituido el método más valioso para el análisis cuantitativo de mezclas complejas de proteínas, por ejemplo, las del plasma sanguíneo. (2)
La electroforesis de zona puede separar una mezcla de proteínas basándose en la carga eléctrica y en el tamaño molecular. (1)
La electroforesis en gel de poliacrilamida puede efectuarse en mayor...
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