Electroforesis.

Universidad Industrial de Santander – Facultad de Salud
Escuela de Microbiología
Programa de Microbiología y Bioanálisis
Asignatura: Biología Molecular

PRÁCTICA DE LABORATORIO: ELECTROFORESIS DE ADN
La electroforesis es una técnica que permite mediante la generación de un campo eléctrico
separar distintas especies moleculares en un pH determinado inmersas en una superficie
portadora. Algenerar este campo existirá una intensidad pasando constantemente entre polo
positivo y negativo, por lo tanto, actuará una fuerza sobre la molécula y esta experimentará una
aceleración hasta obtener una velocidad en la que la resistencia, aportada por la viscosidad del
medio, neutraliza la fuerza impulsora. Es decir, la molécula se desplaza con una velocidad
constante determinada por la cargaque presente la partícula y el coeficiente de fricción, que
depende básicamente del tamaño de la molécula, de su forma y capacidad de restricción que
posea la superficie portadora.
Existen diferentes tipos de electroforesis que varían según, el diseño de la matriz o superficie
portadora, de las características de movilidad electroforética seleccionadas y según la
complejidad de la prueba;entre las más utilizadas están:
Electroforesis de Frente Móvil o Libre
Las sustancias a separar se introducen en un tubo en forma de U, disueltas en un tampón de
pH y fuerza iónica adecuados. Se colocan dos electrodos en los dos brazos del dispositivo,
entre los que se crea un campo eléctrico, provocando que las moléculas de proteína cargadas
emigren hacia los electrodos de polaridad opuesta.Las diferentes proteínas se desplazan a
velocidades diferentes de acuerdo con sus cargas y coeficientes de fricción respectivos,
formándose nubes (o frentes) que se desplazan en la disolución tampón, dada la complejidad
de su interpretación ya es muy poco utilizada.
Electroforesis de Zona
En esta técnica, la muestra está obligada a desplazarse sobre un soporte sólido de papel,
celulosa o gel.La pequeña cantidad necesaria de muestra permite que las moléculas migren en
discretas zonas o bandas. La electroforesis zonal de biomoléculas cargadas, generalmente se
lleva a cabo en una disolución estabilizada con un medio que sirve de soporte como es el caso
de:
 Electroforesis en papel.

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Electroforesis en gel

Un gel es un estado intermedio entre el sólido y el líquido.Este tipo de electroforesis se halla
entre los métodos más resolutivos y convenientes empleados en la separación de
macromoléculas. Los geles de uso más generalizado son: poliacrilamida y agarosa.

Gracilaria
Gelidium
Éstos poseen poros de diferentes dimensiones moleculares que delimitan la velocidad de
traslado y moléculas trasladadas durante el proceso electroforético. De esta forma, laseparación no se produce sólo por las diferentes cargas de las moléculas, sino también por las
diferencias de tamaño.
Existe una gran variedad de tipos de electroforesis en gel, que se pueden agrupar en dos
categorías:
Electroforesis en gel en una dimensión (continuo o discontinuo)
o PAGE-nativa
o SDS-PAGE
o Isoelectroenfoque
Electroforesis en gel en dos dimensiones (bidimensional)
Segúnlas aplicaciones u objetivos que se pretendan conseguir en una práctica o experimento,
se utilizará un tipo u otro de electroforesis en gel. Los geles con pH discontinuos mejoran la
resolución de la electroforesis pues se consigue agudizar las bandas en gran medida dado que
esta técnica precisa de dos geles a pH discontinuo y dos tampones diferentes.
La PAGE-nativa “polyacrylamide gelelectrophoresis” se utiliza para separar proteínas en
condiciones no desnaturalizantes, por tanto, en función de la carga intrínseca de las mismas.

La SDS-PAGE “sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis” es muy útil para
calcular el peso molecular de una proteína concreta ya que separa las proteínas según su
tamaño, dado que el SDS normaliza en todas las proteínas la relación...