ELECTROFORESIS


ELECTROFORESIS

Por: Urtiz Tútuti Ignacio Antonio. Sección 03. Segundo Semestre.

La electroforesis de define como una técnica de laboratorio empleada bajo condiciones de cargas eléctricas controladas con la finalidad de separar biomoléculas según su tamaño y carga eléctrica a través de una solución gelatinosa de donde se diferenciarán bandas, mismas que tendrán una posterior interpretación.Esto se da ya que gran parte de las biomoléculas poseen una carga neta y por consecuencia el campo eléctrico hace que éstas migren, ya que se separan cuando son atraídas al polo opuesto de su carga. Dejando transcurrir  cierto tiempo las moléculas cargadas positivamente se desplazarán hacia el cátodo (el polo negativo) y aquellas cargadas positivamente se desplazaran hacia el ánodo (el polopositivo). 

En el movimiento de moléculas estará involucrada la fricción, ésta fricción será con el solvente de la lamina donde se realiza la electroforesis, ya que suelen ser soluciones de alto peso molecular. El movimiento Browniano o movimiento aleatorio será otra condición involucrada durante el proceso; ya que mientras más aumente la temperatura las moléculas tenderán a moverse de manera dispersay aleatoria, para lo cual el gel atrapará las moléculas al oponer resistencia, por consecuencia las moléculas no se volverán tan dispersas, sino que se acomodarán a manera de bandas, formando un tamiz que efectivamente hará más lenta la migración electroforética, pero el ensanchamiento de las moléculas también se verá reducido.
Se suele hablar de 3 tipos de electroforesis:
De frente móvil: loscomponentes de la muestra están presentes en toda la disolución y se determina ópticamente la posición del frente de avance o frontera con el disolvente.
Zonal: la muestra se aplica como una mancha o banda y sus componentes migran a través de un disolvente, utilizando además un medio que soporta a éste. En este caso no se determina la movilidad, sino que el único objetivo de la técnica es separarlos componentes de la muestra.
Continua: la muestra se aplica también en una zona, pero se suministra continuamente a lo largo del proceso.
El tipo de electroforesis más utilizado y del que hablaremos de sus variantes, será del zonal.


ELECTROFORESIS EN GELES DE POLICRILAMIDA: Los geles de poliacrilamida se forman por  polimerización de la acrilamida por acción de un agente entrecuzador, esquímicamente inerte, de propiedades uniformes, capaz de ser preparado de forma rápida y reproducible. Forma, además, geles transparentes con estabilidad mecánica, insolubles en agua, relativamente no iónicos y que permiten buena visualización de las bandas durante un tiempo prolongado. Además tiene la ventaja de que variando la concentración de polímeros, se puede modificar de manera controlada en eltamaño del poro, lamentablemente cada vez se emplea menos en diagnostico debido a su neurotoxocidad.
 ELECTROFORESIS EN GELES DE GRADIENTES: El uso de geles de poliacrilamida que tienen un gradiente creciente de concentración de archilamida + bisacrilamida, y en consecuencia un gradiente decreciente en el tamaño del poro, pueden tener ventajas sobre los geles de concentraciones uniformes deacrilamida. En un gel en gradiente la proteína migra hasta alcanzar una zona donde el tamaño de poro impida cualquier avance. Una vez se alcanza el limite del poro no se produce una migración apreciable aunque no se detiene completamente. Una de las ventajas de este tipo de geles es que resuelve mejor las bandas pues las concentra en regiones mas estrechas, además de incrementar el rango de pesos moleculares que se pueden resolver en un mismo gel comparado con los de una concentración fija.
ELECTROFORESIS EN GELES DE AGAROSA: La agarosa es un polisacárido (originalmente obtenido de algas, como el agar-agar, pero de composición homogénea), cuyas disoluciones (típicamente de 0.5 a 2 %) poseen la propiedad de permanecer liquidas por encima de 50 grados C y formar un gel, semisólido al enfriarse....