Ensayo Del Descubrimiento Del Genoma Humano

Facultad de Química y Farmacia Bioquímica General Unidad: Genética 25 Abril 2012

MUTACIONES CLONACIÓN: ADN RECOMBINANTE Y PCR
MSc. Tatiana Quinteros

Mutaciones
• Variación en el Mutaciones número y arreglo Cromosómicas de los cromosomas

Mutaciones Génicas

• Alteración de la secuencia de bases del ADN

1. Mutaciones cromosómicas
(aberraciones cromosómicas)
1. Variación en elnúmero de cromosomas: aneuploidía (error durante la meiosis)

2. Pérdida, duplicación o reorganización de un segmento de cromosoma (ruptura espontánea)

Ejemplo 1

• Síndrome de Down o Trisomía 21 (47, 21+)

Klug y Cummings. Essentials of Genetics. 4ª edición

Ejemplo 2

Síndrome del maullido de gato (Cri du chat) Deleción de una parte del cromosoma 5 (46,5p-)

2. Mutaciones génicasCambio en la secuencia normal de ADN Pueden ser clasificadas en varias categorías Espontáneas – Inducidas

Gaméticas – Somáticas Dominantes – Recesivas Mutaciones morfológicas Mutaciones bioquímicas

Tipos de mutaciones génicas
según el tipo de cambio en la secuencia de ADN

1. Puntuales o Sustituciones 2. Inserciones 3. Deleciones 4. Inversiones 5. Duplicaciones 6. Transposiciones¿Cómo se originan las mutaciones?
1. Mutaciones espontáneas 1.1 Errores en la replicación 1.2 Lesiones espontáneas despurinización, desaminación oxidación por radicales libres 2. Mutaciones Inducidas: agentes mutágenos Agentes químicos (agentes intercalentes), físicos (UV causa dímeros de timina), biológicos.

La mayoría de mutaciones son silenciosas pero algunas causan graves enfermedades
(a)Secuencia normal de ADN ADN ARNm Proteína (b) Secuencia mutada de ADN ADN ARNm

Proteína

Proteína Funcional

Proteína No Funcional

Belk. Biology Science for Life

Clonación
Clonar = copiar Clonación: creación de clones Clones = copias genéticamente idénticas entre si

Hay varios tipos de clonación:
– Clonación de secuencias de ADN (genes) – Clonación de células – Clonación deorganismos (animales, plantas)

Clonación
Clonación de secuencias de ADN (genes) Producción de una gran cantidad de copias idénticas de un gen.
– In vivo: en células, por medio de técnicas de ADN recombinante – In vitro: PCR. Reacción en cadena de la polimerasa

Tecnología del ADN recombinante
Conjunto de técnicas para la manipulación in vitro del material genético de los seres vivos, lascuales permiten la creación y análisis de nuevas moléculas de “ADN recombinante” que no se encuentran como tal en la naturaleza.

Molécula de ADN recombinante
Contiene ADN de dos organismos diferentes
1

ADN del organismo de interés. Puede ser un gen o parte de él.

2

ADN del vector. Sirve de vehículo para transportar el ADN de interés. Puede ser de una bacteria o un virus.

Moléculade ADN recombinante
ADN de interés ADN del vector bacteriano (plásmido)

bacteria

Elementos básicos de la clonación en células
• • • • • ADN de interés Vectores de clonación (vehículos moleculares) Enzimas de restricción (tijeras moleculares) ADN ligasa (pegamento para unión de ADN) Células huesped

PASOS BÁSICOS EN LA CLONACIÓN DE UN GEN

Enzimas de Restricción
Endonucleasas derestricción Grupo de enzimas de origen bacteriano que cortan la doble cadena de ADN en secuencias determinadas.



Las enzimas de restricción reconocen y cortan una secuencia específica de ADN (4-8 pares de nucleótidos) que es palindrómica, es decir, tiene la misma secuencia en las dos cadenas al leer en dirección 5’ 3’

5’ 3’

G A A T T C 3’ C T T A A G 5’

¿Cuál es una secuenciapalindrómica?
a) G G A T C C CC TAGG

c) C T G C A G GACGTC

b) G G T A C A CC ATGT

d) A G T A G T T C ATCA

Las enzimas de restricción realizan cortes cohesivos o escalonados: cortan la cadena de ADN en diferentes puntos de la secuencia de reconocimiento

Los enlaces cortados pueden volver a unirse por medio de la enzima ligasa

Colas complementarias

Corte cohesivo /escalonado...