ensayo

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Aislamiento y caracterización estructural de acetogeninas
obtenidas de semillas de Annona cherimolia y Annona muricata.
Evaluación genotóxica y potencial quimioterapéutico.

Tesis

Que para obtener el grado de
Doctor en Ciencias Quimicobiológicas
Presenta:
Karol Karla García Aguirre.
Directores:
Dr. Luis GerardoZepeda Vallejo.
Dr. Eduardo Madrigal Bujaidar.

México, D.F.

Enero 2009

El presente trabajo se realizó en el departamento de Química Orgánica y el departamento
de Morfología de la Escuela Nacional de Ciencias Biológicas del instituto Politécnico
Nacional bajo la dirección del Dr. Luis Gerardo Zepeda Vallejo y el Dr. Eduardo Madrigal
Bujaidar, gracias al apoyo otorgado por el CONACyTbajo el registro número 178125.

Contenido
Página
Contenido

i

Índice de figuras

iv

Índice de tablas

vii

Índice de abreviaturas

viii

Resumen

ix

Abstract

x

1. Introducción

1

2. Antecedentes

2

2.1 Familia Annonaceae

2

2.1.1 Annona cherimolia

3

2.1.2 Estudio fitoquímico en Annona cherimolia Mill.

3

2.1.3 Annona muricata

62.1.4 Estudio fitoquímico de Annona muricata.

7

2.2 Acetogeninas (ACG)

8

2.2.1 Características estructurales

8

2.2.2 Mecanismo de acción de las ACG sobre el sistema celular

10

2.2.3 Relación estructura-actividad

11

2.2.4 Actividades biológicas reportadas

12

2.2.4.1 Actividad citotóxica

12

2.2.4.2 Actividad antimicrobiana

14

2.2.4.3 Actividadantiparasitaria

14

2.2.4.4 Actividad plaguicida

14

2.3 Cáncer

15

2.3.1 Etapas del cáncer

16

i

2.3.2 Cáncer de colon

19

2.3.3 Azoximetano (AOM)

21

2.4 Evaluación del efecto genotóxico

22

2.4.1 Micronúcleos

23

2.5 Citotoxicidad

25

3. Justificación

27

4. Objetivos

28

5. Metodología

29

5.1 Aislamiento de ACGs a partir de la semilla deAnnona cherimolia y
Annona muricata

29

5.1.1 Material vegetal

29

5.1.2 Obtención de los extractos

29

5.2 Separación cromatográfica preliminar mediante cromatografía en columna

30

5.3 Validación de un método cromatográfico mediante HPLC para la separación
de ACG.

30

5.4 Aislamiento de ACGs mediante la técnica de HPLC

33

5.5 Caracterización estructural

335.6 Evaluación de la toxicidad de una ACG obtenida de las semillas de Annona
muricata en un estudio subcrónico in vivo

34

5.6.1 Determinación de la DL50

35

5.6.2 Inducción de criptas con AOM

36

5.6.3 Evaluación de la genotocixidad y citotoxicidad en sangre periférica de ratón

36

5.6.4 Evaluación de apoptosis en plasma sanguíneo

37

5.6.5 Evaluación del efectoquimioterapéutico

38

6. Resultados y Discusión

39

6.1 Aislamiento, purificación y elucidación estructural de acetogeninas a

ii

partir de la semilla de Annona cherimolia Mill y Annona muricata

39

6.1.1 Obtención de los extractos crudos

39

6.1.2 Purificación de acetogeninas mediante cromatografía en columna y HPLC

39

6.2 Resultados de la validación del métodocromatográfico (HPLC) para la
purificación de ACGs

40

6.2.1 Purificación de ACGs mediante HPLC

43

6.3 Determinación estructural de las ACG aisladas de A. muricata y A. cherimolia

45

6.3.1 Consideraciones generales

45

6.3.2 Propuestas estructurales de las ACG aisladas de A. muricata
y de A. cherimolia Mill (2F2 y 2F3)

47

6.3.2.1 Datos de ultravioleta (UV) y de infrarrojo (IR)48

6.3.2.2 Análisis de los espectros de RMN 1H y de 13C y el uso de criterios de
desplazamiento químico para la asignación de configuración relativa

48

6.3.2.3 Determinación de la composición exacta y de la isomería posicional
mediante el análisis de los espectros de masa de alta y baja resolución

59

6.4 Evaluación de la toxicidad de una ACG obtenida de las semillas de
Annona...