enzima

TEMA 5: ENZIMOLOGÍA CLÍNICA
1. Valor diagnóstico de las enzimas en el plasma.
2. Principios del análisis de enzimas
3. Análisis de isoenzimas.
4. Determinación enzimática de sustratos.
1.

Valor diagnóstico de las enzimas en el plasma

La enzimología clínica es la aplicación del conocimiento de las enzimas
(proteínas especializadas en la catálisis de reacciones orgánicas) aldiagnóstico, tratamiento y pronóstico de la enfermedad.
Aunque son raras las enzimas exclusivas de un tejido, la alteración de la
concentración sérica de un enzima determinada orienta sobre los tejidos
más probablemente afectados. Además, muchas enzimas muestras distintas
formas moleculares (isoenzimas) características de distintos tejidos. El
análisis isoenzimático de la enzima cuya concentraciónsérica se encuentra
alterada a menudo aporta información adicional sobre las causas de dicha
alteración.
Muy frecuentemente la información deseada se obtiene examinando dos o
más enzimas séricas ej. una elevación en ?-glutamil-transferasa indicará,
con gran probabilidad, colestasis si aparece aumentada la fosfatasa alcalina
sérica.
El tipo de alteración observada también proporciona graninformación:
•
Lo más frecuente es encontrar elevaciones debidas a aumentos de
permeabilidad celular daño tisular.
•
Es posible detectar disminuciones debidas a enfermedades
crónicas que originan disfunción celular.
•
El grado de alteración de la concentración catalítica puede ser
orientativo de determinadas alteraciones ej. las aminotransferasas séricas
muestran aumentos más importantes enhepatitis agudas que en hepatitis
crónicas.
Dependiendo del grado de permeabilidad y de la distancia entre células y
capilares existirá un mayor o menor desfase entre el momento de detección
del aumento de actividad enzimática y el momento de daño tisular.
2. Principios del análisis de enzimas
La concentración de enzimas en suero es muy baja, sin embargo, dada su
eleva capacidad catalítica, esposible determinar su actividad y presuponer
que ésta es proporcional a su concentración. Por tanto, el estudio de las
enzimas en el laboratorio se basa en la demostración “in vitro” de la
actividad catalítica.
Se puede determinar la actividad enzimática analizando:
• La aparición de algún producto
• La desaparición del sustrato

1

•

La variación de un cofactor o de algún componentede la reacción

En definitiva, la actividad de una enzima se mide mediante la determinación
de la cantidad de sustrato formado por unidad de tiempo, en condiciones
exactamente definidas (pH, Tª…) y estrictamente controladas.
La actividad enzimática se expresa Unidades Internacionales (UI) por
unidad de volumen (UI/ml, UI/L…) siendo una UI la cantidad de enzima que
transforma un micromol desustrato por minuto en condiciones estándar
previamente establecidas.
En una reacción enzimática podemos diferenciar 3 fases: fase de retardo,
fase lineal y fase de agotamiento de sustrato.

La fase de retardo tiene lugar inmediatamente después de mezclar los
reactivos con la muestra biológica. Es una fase de encuentro y acoplamiento
de sustrato y enzima. Su duración es muy variable(segundos a minutos). Al
finalizar esta fase comienza la fase lineal en la que la formación de
producto permanece constante, siendo la concentración de enzima de la
muestra es el único factor limitante. Por último, a medida que va
transcurriendo la reacción, llega un momento en que el sustrato u otro
reactivo se van agotando (fase de agotamiento de sustrato) y la
velocidad de reacción disminuyehasta anularse.
Para que una determinación enzimática sea válida es necesario realizarla
en la fase lineal donde el único factor limitante es la concentración
de la propia enzima y las condiciones de reacción son las óptimas
(exceso de sustrato y otros reactivos…). Para ello se suele trabajar con una
concentración de sustrato superior a la Km. Así, en un ensayo enzimático, el
límite de...