Enzimas

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enzimas

Enzimas de Restricción
 
*         Las enzimas de restricción, también conocidas como endonucleasas, son enzimas que cortan los enlaces fosfodiester del material genético a partir deuna secuencia que reconocen.
 
*         Las mismas permiten cortar DNA de hebra doble, donde reconocen secuencias palindrómicas (secuencias que se leen igual en ambas direcciones).
 
 *         Son extraídas de organismos procarióticos (bacterias), donde actúan como un mecanismo de defensa, para degradar material genético extraño que entre en la célula. Las bacterias tienen lacapacidad de metilar su DNA, lo cual sirve para distinguir entre el DNA extraño y el DNA propio. Las enzimas de restricción no pueden cortar DNA metilado, de este modo solo afectan el DNA extranjeroy no el DNA bacterial.
 
*         Existen 3 tipos de enzimas de restricción:
 
 
1. 1.      Tipo I y Tipo III:
a. a.      Tienen actividad de restricción (cortan) y modificación(metilan).
b. b.      Cortan a cierta distancia de la secuencia de reconocimiento, las Tipo I cortan lejos de la secuencia de reconocimiento, ya sea río arriba o río abajo. Las Tipo III cortan de5-8 bases antes o después de la secuencia que reconocen.
c. c.      Necesitan ATP para moverse a través de la molécula de DNA, desde el lugar de reconocimiento hasta el sitio del corte.
 
2. TipoII:
a. a.      Sólo tienen actividad de restricción.
b. b.      Cortan de manera consistente y predecible dentro de la secuencia que reconocen.
c. c.      Sólo requieren Mg++ comocofactor.
d. d.      No necesitan ATP.
 
*         Aplicaciones de las enzimas de restricción:
1. 1.      Hacer mapa de restricción de un plásmido o bacteriófago.
2. 2.      Fragmentar DNAgenómico para separación de electroforesis y “Southern Blot”.
3. 3.      Generación de fragmentos para ser usados como sondas marcadas en “Southern”y “Northern” blotting.
4. 4.     ...
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