Enzimas

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE NUEVO LEÓN
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
LICENCIADO EN BIOTECNOLOGÍA GENÓMICA CURSO DE INGENIERÍA GENÉTICA Nombre del estudiante: Omar Martin Ledesma Guadarrama Fecha: 4-MZO-11

RÚBRICA DE EVALUACIÓN
PUNTOS FORMATO Contenido global, ortografía, sintaxis, presentación OBJETIVO FUNDAMENTO MATERIALES Y EQUIPOS PROCEDIMIENTO RESULTADOS RECOMENDACIONES Y CONCLUSIONESBIBLIOGRAFÍA TOTAL PUNTOS ACREDEITADOS

10 10 15 10 20 20 10 5 100

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FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
LICENCIADO EN BIOTECNOLOGÍA GENÓMICA CURSO DE INGENIERÍA GENÉTICA TÍTULO DE LA PRÁCTICA extracción de DNA genómico apartir de
Fecha

4-MZO-11

Elaborado por: Omar Martin Ledesma Guadarrama

Páginas

5

OBJETIVO * comprobar el fundamentoteórico de la acción de la enzima de restricción tipo II (Xhol) sobre una molécula de DNA plasmidico de E. coli DH5α pTopoαGlu * Construcción de un mapa de restricción de DH5α pTopoαGlu con la enzima de restricción (Xhol) mediante el programa bioinformatico webcutter y hacer una comparación con el resultado de la electroforesis para corroborar la existencia de los mismos fragmentos de restricciónFUNDAMENTO Las enzimas de restricción también conocidas como endonucleasas, Son extraídas de bacterias, donde actúan como mecanismo de defensa para degradar material genético extraño que entre en la célula, cortan los enlaces fosfodiester a partir de una secuencia que reconocen en este caso una secuencia palindrómica (secuencia que se lee igual en ambas direcciones) y producen tres tipos de cortes:5´-protuberante, Romo y 3´-protuberante, el cual cortan a manera escalonada en dos puntos diferentes (protuberantes) y Romo que cortan en un sólo punto. Su clasificación en ingeniería genética (sobre todo las de tipo II debido a su mayor utilidad las cuales reconoce secuencia de un tamaño de 4 ó 6 pb) está dada por la asignación de los siguientes caracteres: primera letra= género, segunda=especie, Tercera letra= cepa, Cuarto (numero romano)= primera endonucleasa aislada de esta cepa; su utilidad en ingeniería genética es clave debido al corte de puntos específicos de una molecula de DNA que en efecto si se aparea la secuencia con otra que fue cortada con la misma enzima de restricción se podrá generar una molecula de DNA recombinante.

MATERIALES Y EQUIPOS

Equipos
Juego demicropipetas Ordenador (construcción restricción) mapa de

Materiales
Gradillas de plástico Hieleras de plástico Tubos Eppendorff de 1.5 o 2 mL estériles. Contenedores para deshechos de material biológico Cajas de plástico para guardar tubos con muestras Puntillas estériles para micropipetas (azules y amarilla)

Material biológico, soluciones, medios de cultivo y reactivos
Buffer H 10x BSA 100x DNAde E. coli DH5α pTopoαGlu Agua (libre) Hielo en escarcha Enzima de restricción tipo II (Xhol)

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LICENCIADO EN BIOTECNOLOGÍA GENÓMICA CURSO DE INGENIERÍA GENÉTICA

PROCEDIMIENTO (digestión enzimática y construcción mapa de restricción con webcutter) 1. .- tomar 17.6 ul de agua miliq, 2. .- depositar en tuboeppendorff 3. .- tomar 4 ul de buffer H 4. .-depositar en tubo eppendorf 5. .- tomar 0.4 ul de BSA (albumina de suero bovino) 6. .-depositar en tubo eppendorf 7. .- tomar 16ul de DNA topo aGlu 8. .- depositar en tubo eppendorf y transferir 19 ul de ese coctel a otro tubo eppendorf 9. .- los tubos eppendorf se rotularan: uno "negativo" y el otro "muestra" 10. .- tomar 1ul de enzima XhoI y agregarlo al tubomuestra 11. .- realizar la electroforesis correspondiente para la obtención de los fragmentos de restricción Construcción mapa de restricción con webcutter 12. Localizar en el portal de internet la pagina del programa de webcutter 2.0 13. Localizado el programa introducir la secuencia correspondiente de DH5α pTopoαGlu 14. Seleccionar la opción de análisis de secuencia circular, la opción de...