enzima

Guia de trabajo previo N°3 “Actividad Enzimatica”

INTRODUCCIÓN:
La ecuación de Michalis-Menten es:

Tomando inversos en ambos miembros se obtiene la linealización de Lineweaver-Burk:que tiene la forma de una línea recta:



de manera que representando 1/v frente a 1/[S] podremos obtener Vmáx y KM.

a) Para ello hacemos la siguiente tabla auxiliar:



A continuaciónrepresentamos estos datos en Excel:





Como:



Como:



b) Recordando la definición de k2 y sustituyendo, nos quedaría:


(Este número de recambio significaría que 1 molécula de enzimaes capaz de hidrolizar 52 moléculas de sustrato por segundo)

A modo de resumen:



Inhibición
Inhibidor: Efector que se une al enzima y hace disminuir su actividad, mediante interacciones conel centro activo u otros centros específicos.

Se excluyen todos aquellos agentes que inactivan a la enzima a través de desnaturalización de la molécula enzimática.

Dos tipos de inhibidores:1. Inhibidores reversibles: establece un equilibrio con la enzima libre, con el complejo enzima-substrato, o con ambos.
a. COMPETITIVOS: El inhibidor se fija al centro activo de la enzima libre,impidiendo la fijación del sustrato.
b. NO COMPETITIVOS: El inhibidor se fija a la enzima independientemente de que lo haga o no el sustrato. No impide la fijación del sustrato a la enzima, pero sí laacción catalítica.
c. ACOMPETITIVOS: El inhibidor se fija únicamente al complejo enzima-sustrato una vez formado, impidiendo la acción catalítica

2. Inhibidores irreversibles: modifican químicamentea la enzima mediante uniones covalentes.












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1. Ejercicio:
La hidrólisis de N-glutaril-L-fenilalanina-p-nitroanilida (GPNA) para dar p-nitroanilina yN-glutaril-L-fenilalanina, está catalizada por la enzima a-quimotripsina. En unas determinadas condiciones de pH y temperatura, los datos cinéticos obtenidos han sido los siguientes:



a) Asumiendo una...