enzimas

El inhibidor a utilizar es fosfato
Objetivo determinar los parámetros cinéticos para la fosfata en presencia y ausencia de inhibidor
determinar [s] y Vo
el sutrato que vamos a utilizar esp-nitrofenil fosfato
el producto que vamos a medir es p-nitrofenol
toda fosfatasa cataliza la hidrolisis de fosfato
al ser preparado el p-nitrofenol con NaOH tiene color, si es preparado con agua notiene color
la base se come al proton del p-nitrofeniol para neutralizarse y se va a generar un producto desprotonado que se llama p-nitrofenolato tiene la capacidad de absorber luz a 405nm.Velocidad inicial es la formación de producto en un cierto tiempo. Para nosotros va a ser la concentración de p-nitrofenol en el tiempo (10 min).

Procedimiento

Hacer una curva de calibración paradeterminar cuanto producto esta generando nuestra enzima
Cinetica sin inhibidor utilizar micropipetas p1000
Le damos ph 5 porque es una fosfatasa acida y funciona bien en un medio acido porque susitio activo se siente bien con el estado de protonacion que tiene entre ph que van de 4 a 6.
Buffer a ph 5 es un buffer de citrato formado por citrato y citrato sodio
La enzima fosfatasa acidaviene del germen del trigro
Generar un set de 5 tubos sin inhibidor que contengan 4,5 ml de NaOH pasado los 10 min en ellos añadir una alícuota de 0,5 ml del tubo 1 al tubo 1 sin inhibidor y asisucesivamente
El NaOH detiene la reacción estoy pasando de un medio acido a uno alcalino para romper el buffer
Necesitamos un medio alcalino para que el producto tenga color
La concentración delproducto es 60 mM

Molaridad= mol / litro
En un cuadro realizar un calculo de la tabla 1 debe llevar titulo y breve descripción

Realizar un grafico 1: curva de calibración…
Sacar la ecuación dela recta abs= m x (nmol de pnp) + n

Tabla 2

Ejemplo 0.25 x 2,5/ 2, 5 = 0, 5 micromolar en todos los casos es lo mismo solo cambia la concentración inicial el resto es constante.

Observación...