espectrofotometria

I.

INTRODUCCIÓN.

La espectrofotometría es el método de análisis óptico más usado en las
investigaciones químicas y biológicas. El espectrofotómetro es un
instrumento que permite comparar la radiación absorbida o transmitida
por una solución que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una
que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia.
Todas las sustancias puedenabsorber energía radiante, aun el vidrio que
parece ser completamente transparente absorbe longitud de ondas que
pertenecen al espectro visible; el agua absorbe fuertemente en la región
del infrarrojo.
La absorción de las radiaciones ultravioleta, visibles e infrarrojas depende
de la estructura de las moléculas, y es característica para cada sustancia
química.
Cuando la luz atraviesa unasustancia, parte de la energía es absorbida; la
energía radiante no puede producir ningún efecto sin ser absorbida.
El color de las sustancias se debe a que éstas absorben ciertas longitudes
de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a
nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbidas.
La base de la espectrofotometría se centra en dos leyes principalmente:
LEY DE BEERLa Ley de Beer declara que la cantidad de luz absorbida por un cuerpo
depende de la concentración en la solución.
Por ejemplo, en un vaso de vidrio tenemos agua con azúcar diluida y en
otro tenemos un vaso con la misma cantidad de agua pero con más
azúcar diluida. El vaso es una celda fotoeléctrica, y la solución de azúcar
es la que se mide su concentración.
Según la ley de Beer, sihiciéramos que un rayo de luz atravesara el primer
vaso, la cantidad de luz que saldría del otro lado seria mayor que si
repitiéramos esto en el segundo; ya que en el segundo, las ondas

electromagnéticas chocan contra un mayor número de átomos y/o
moléculas y son absorbidos por estos.
LEY DE LAMBERT
En la Ley de Lambert se dice que la cantidad de luz absorbida por un
objeto depende de ladistancia recorrida por la luz.
Por ejemplo, retomando el ejemplo de los vasos, pero ahora, pensemos
que ambos tiene la misma cantidad de agua y la misma concentración de
azúcar, pero, el segundo tiene un diámetro mayor que el otro.

Según la ley de Lambert, si hiciéramos que un rayo de luz atravesara el
primer vaso, la cantidad de luz que saldría del otro lado seria mayor que si
repitiéramos estoen el segundo; ya que en el segundo, las ondas
electromagnéticas chocan contra un mayor número de átomos y/o
moléculas y son absorbidos por estos; de la misma forma que se explicó en
la ley de Beer.
Un espectrómetro típico posee cuatro componentes básicos: una fuente
de radiación que tiene intensidad constante en el rango de longitud de
onda que cubre (usualmente es lámpara de tungsteno paraluz visible, y
deuterio para ultravioleta), un compartimiento para la muestra, un
monocromador que separa la banda de longitud de onda deseada del
resto del espectro y la dispersa al compartimiento de la muestra, y un
fotodetector, que mide cuantitativamente la radiación que pasa por la
muestra.

II.

OBJETIVOS:
1 . Identificar los instrumentos y equipos que se utilizan en unlaboratorio de Bio química.
2.

III.
3.1

Conocer el manejo de la Espectro fo to metría.

MATERIAL Y PROCEDIMIENTO:
Materiales y equipo s
3.1.1. Materiales:
A.

De vidrio :
y

10 tubos de ensayo 10x75

y

02 Pipetas 10 ml

B.

De po lipro pileno :
y

C.

20 tips para m icro pipeta s
Reactivo s:

y

Azul de Metileno 0,1 mg/mL

y

Safranina 0,1 m g/mL

y

Aguadestilada 500 mL

3.1.2. Equipos e instrumento s:
y

01 Espectro fo tó metro Genesys 10 UV

y

02 Micropipetas: 100-1000 µL / 10 - 100 µL.

3.2

Pro cedimiento :
3.2.1. Espectro fo to metría:
DETERMINACIÓN DE LOS ESPECTROS DE ABSORCIÓN: Según la
ta bla, determ inar los espectros de absorción de cada
una de las soluciones de colorantes (azul de metileno y
safranina), leyendo las...