Estudio cinético de la enzima -amilasa.

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PRACTICA 8
Estudio cinético de la enzima -amilasa.

OBJETIVO
 Comprobar la influencia de la concentración de enzima, sustrato y pH en la actividad enzimática de la -amilasa.

REACTIVOSEnzima: Se prepara una solución colectando 1 mL de saliva (previo enjuague de la boca con agua destilada) y diluyéndolo hasta 20 mL con agua destilada.
Almidón al 0.5 %.
Reactivo de Lugol: Se preparadisolviendo 1 g de iodo, 2 g de KI en 200 mL de agua destilada.
Disoluciones tampón de pH 5,0; 6,8 y 8,0.

Procedimiento # 1: estudio de la influencia de [E]
Se colocan y marcan para suidentificación 4 tubos de ensayo, posteriormente se agrega a cada uno 2 mL de la solución de almidón al 0.5 %.

Seguidamente se añade respectivamente a cada tubo 0.1, 0.2, 0.3 y 0.4 mL de la solución de laenzima, y complete hasta un volumen de 0.5 mL con agua. (Añada primeramente los volúmenes complementarios de agua y luego la solución de la enzima, pues de lo contrario la reacción comenzará averificarse y no tendrá en cuenta el tiempo transcurrido). Realice la adición de la enzima a los tubos lo más rápido posible (agitando la mezcla del tubo) e inmediatamente después de adicionar la solución alúltimo tubo ponga en marcha un cronómetro y comience a medir el tiempo del experimento.

El seguimiento de la reacción se efectúa en una placa de 24 pozos mediante la reacción de la soluciónexperimental presente en cada tubo con el Lugol; Al cabo del primer minuto se toma una alícuota (3 gotas) de cada tubo de ensayo utilizando una pipeta beral (una por cada tubo) y se colocan en surespectivo pozo, inmediatamente se adiciona una gota del reactivo de Lugol. Observe y anote el color para cada pozo y repita esta acción cada minuto transcurrido hasta que no se observe reacción con ellugol. Esto ocurrirá cuando la mezcla de las dos soluciones quede del color original del Lugol. Prepare en uno de los pozos (el ultimo de la izquierda) una solución de control mezclando tres gotas de...
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