estuidiante

Caracterización de
Taninos
Katherina Fernández E.
Universidad de Concepción
Octubre 2007

¿Qué son los Taninos?
“Son compuestos fenólicos solubles en agua,
con pesos moleculares entre 500-3000, que a
demas de dar las reacciones fenolicas usuales,
poseen la habilidad de reaccionar y precipitar
con alcaloides, gelatinas y otras proteínas”
Bate-Smith and Swain, 1962

1

TaninosHidrolizables

No Hidrolizables (Condensados)

(Polímeros de ácidos fenólicos)

(Polímeros de flava-3-oles)

Florotaninos
(Grupo minoritario y recientemente descubierto)

Difieren en su estructura química como en su
origen biosintético

Taninos Hidrolizables
Son esteres de ácidos fenólicos (ácido gálico y elágico), con
una azúcar (glucosa) o un polialcohol

Ácido GálicoGalotaninos

Ácido Elágico

Elagitaninos

Desde 1989 gracias a Haslam, Okuda y Yokida
⇒ más de 750 nuevas estructuras se han elucidado

2

Galotanino

Taninos Condensados
Unidad básica: flavan-3-ol
Catequinas

3

Proantocianidas: Polímeros de flavan-3-oles
Son unidades de flavan-3-ol unidas entre si por
enlaces C-C en la posición 4→8 y 4→6

Florotaninos
Son aislados desde variasespecies de algas pardas
Sus estructuras están constituidas de unidades de
floroglucinol unidas por C-C o C-O

Aislado desde Eisenia Arbórea

4

Diversos Alimentos y Vegetales
Poseen Taninos

Métodos para analizar taninos
Separación
(Cromatografía)

Identificación
(Espectroscopía/Espectrometría)

5

Cromatografía
Un poco de historia……
Primera aplicación por Tswett 1906Adsorción cromatográfica de pigmentos de hoja en una
columna de carbonato de calcio
Cromatografía de partición liquido-liquido (Martin and Synge,
1941)
Cromatografía gaseosa (James and Martin, 1952)
Cromatografia en papel (Bate Smith 1964)
High Pressure Liquid Chromatography (HPLC) (1966) y la
incorporación DAD (1982) y el desarrollo de materiales para
nuevas columnas
mejoró el lacaracterización → fenoles

Cromatografía
Mejores resultados y actividades son obtenidos si los
taninos son previamente purificados y/o concentrados

Seed

Extracts dissolved in 20mL
buffer phosphate (pH 7.0)

DSC18 y DSC
18Lt

100
berries

Extraction

Skin

Wash
Monómeros
Oligomeros
Proantocianidinas

6

Cromatografía
Monómeros y oligómeros:
Fase Reversa (RP-HPLC)
Separarcomponentes por
polaridad
→ gradientes
→ solvente acuoso ⇒ a un solvente
orgánico

Columnas
→ Reversed-phase silica (C-18)
→ Polystyrene divinylbenzene (PSDVB)
Extraído de Lazarus et al., 1999

Fase Normal (NP-HPLC)

Cromatografía
Proantocianidinas

Extraído desde Jerez et al., 2006

7

Cromatografía
Proantocianidinas:
Caracterización Estructural
Catálisis ácida en la presenciade un agente nucleofilico (Phloroglucinol,
Tiol, Benzil mercaptano) seguido de detección en HPLC
Cromatografia de permeación en gel (GPC)
Win

es
Sugar, Acids and LMW
phenolics were discarded

Proanthocyanidins
(freeze-dried)

Phloroglucinolysis

HPLC

Toyopearl HW-50F
(Kennedy and Jones, 2001)

Concentration, mDP, %Yield

Cromatografía
Proantocianidinas: Caracterizaciónestructural por
Phloroglucinólisis
Cromatograma HPLC
90

Ascorbic Acid

(280 nm)
Extension units:
1, epigallocatechinphloroglucinol (EGC);
2, catechinphloroglucinol (C);
3 epicatechinphloroglucinol (EC) and
5, epicatechin gallateploroglucinol (ECG).

3

Phloroglucinol

80

Absorbance (mAU)

70
60
50
40

1

30

5

Terminal units:
4, catechin (C) and
6, epicatechin(EC).

20

2

4

6

10
0
0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

Retention time (min)

8

Espectrometría/Espectroscopía
UV-Visible Espectrometría
Espectro flavan-3-oles

⇒

Max: 270-290 nm →A ring

Común a todos los flavonoides

No tiene utilidad para identificación DE TANINOS

Se necesita incorporar otros indicadores que den solo cuenta
de los taninos...