EXTRACCIÓN DE ADN A PARTIR DE SANGRE

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  • Publicado : 23 de junio de 2013
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PRÁCTICA N°2
EXTRACCIÓN DE ADN A PARTIR DE SANGRE
I. Introducción:

El ADN es el ácido desoxirribonucleico responsable de contener toda la información genética de un individuo o ser vivo, información que es única e irrepetible en cada ser ya que la combinación de elementos se construye de manera única. Este ácido contiene, además, los datos genéticos que serán hereditarios de generación engeneración, por lo cual su análisis y comprensión es de gran importancia para realizar cualquier tipo de investigación científica que verse sobre la identidad o sobre las características de un individuo.
La información que nos ofrece el ácido desoxirribonucleico o ADN es aquella que se vincula directamente con la conformación de cualquier tipo de células en un ser vivo. Esta información setransporta a través de los segmentos conocidos como genes, construcciones responsables de dar forma a los diferentes complejos celulares de un organismo.

El ADN podría describirse como una compleja cadena de polímeros (o macrocélulas), polímeros que están entretejidos de manera doble a través de puentes de hidrógeno. La estructura del ADN se complejiza desde los pares de nucléotidos, pasando a formarhistonas, nucleosomas y los cromátidas que forman los famosos cromosomas. Los cromosomas se hallan ubicados en el núcleo de una célula y la combinación específica de los mismos es lo que determina el género del ser vivo. Los cromátidas están entonces compuestos por toda esta cadena de elementos que comienza con el ADN.
La manipulación del ADN tiene múltiples aplicaciones en patologías humanas,mapeo y secuenciación de genes sobre todo con fines terapéuticos. Para ello es necesario extraer el ADN de diferentes tejidos, sangre, mucosa bucal, entre otros, a través de diferentes métodos como el del fenol-cloroformo-Alcohol isoamílico, chelex, lisis por calor, cloroformo y alcohol Isoamílico, por columnas de sílica y Beads magnéticos.
En la siguiente práctica se desarrolla la extraccióndel ADN utilizando columnas de sílica, que tiene por objetivos aprender dicha técnica de extracción y mencionar en fundamento otras como la del cloroformo y alcohol isoamílico. Busca también la extracción del ADN a partir de leucocitos de la sangre.
II. Materiales y Métodos
La técnica que se realizó en esta práctica es la de Columnas de Sílica, la ventaja de este método es que resulta ser rápido,eficiente y sencillo. Se utilizan los siguientes reactivos y materiales:
Proteinasa K
Kit de Extracción de DNA
Etanol al 100 %
Sales Caotrópicas (Buffer AL)
Agua grado Biología Molecular
Tubos Eppendorf
Micropipeta
Microcentrifuga
Tubos de toma se sangre con EDTA
Jeringas con ajugas
Etanol al 100% y 70%
Baño María


III. Desarrollo:






Usando una jeringa tomar 3 ml desangre, que será depositado en un tubo anticoagulante EDTA , se procede a la centrifugación para separar la sangre y luego se elimina el suero.
Se toman 300µL de la muestra y se coloca en un tubo de ensayo con 200 µL de Buffer AL , 20 µL de proteinasa K y 100 µL del Buffer PBS. Una vez mezclado se lleva a 50 °C por 15 minutos. Luego se añade 200 µl de etanol a 100 % y se colocan en lacolumna de sílica como se puede apreciar en la figura 4, se lleva a centrifugación por 30 segundos a 8000rpm.
Se descarta el líquido y se lava con 400 µl del buffer AW1 o su reemplazo etanol al 70%, se vuelve a centrifugar por 1 minuto, al termino se descarta el líquido del tubo colector y se añade 400 µl del buffer AW2 o etanol al 100 % para lavar, nuevamente se centrifuga por 3 minutos paraelimina el buffer.
Al finalizar de añade 40 µl de agua estéril grado Biología Molecular o el buffer TE o AE para eluir solamente al ADN, se deja reposar 15 minutos y luego se centrifuga a 8000rpm por 2 minutos.

IV. Resultados:
Se eluyo el ADN y se realizara su posterior análisis mediante electroforesis.

V. Conclusiones:
Él método utilizando columnas de sílica es una técnica simple para poder...
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