Extracción de ADN y tinción con carmín

Extracción de ADN de mucosa bucal y tinción con acetato de carmín
Introducción:
Las técnicas físicas y químicas de separación y análisis de componentes macromoleculares del núcleo y del citoplasma celular han sido decisivas para incrementar la compresión de la biología a nivel molecular. Entre ellas, la extracción y purificación de ácidos nucleicos constituyen un grupo de técnicas básicas queproporcionan el material adecuado para estudios posteriores más especializados. De la calidad del material obtenido con estas técnicas básicas de aislamiento y purificación dependerá el éxito de cualquier manipulación posterior. (Maniatis, T y col 1989)
La saliva contiene material celular. Se puede extraer ADN, para su análisis, a partir de marcas de mordisco, colillas de cigarrillo, sellos decorreo pegados en el sobre o cierres engomados de sobre. (Tenovuo, J. 1997)
La saliva es una secreción compleja proveniente de las glándulas salivales mayores en el 93% de su volumen y de las menores en el 7% restante, las cuales se extienden por todas las regiones de la boca excepto en la encía y en la porción anterior del paladar duro. (Tenovuo, J. 1997)
Las glándulas salivales están formadaspor células acinares y ductales, las células acinares de la parótida producen una secreción esencialmente serosa y en ella se sintetiza mayoritariamente la alfa amilasa, esta glándula produce menos calcio que la submandibular, las mucinas proceden sobre todo de las glándulas submandibular y sublingual y las proteínas ricas en prolina e histatina de la parótida y de la submandibular. Las glándulassalivales menores son esencialmente mucosas. (Sánchez, D y col 2007)
El lisado de células epiteliales proporciona suficiente ADN para ser analizado. La obtención de células utilizando un enjuague bucal salino estéril no causa dolor, hemorragia y no es invasivo a comparación de otros métodos de obtención de ADN. (Sánchez, D y col 2007).
El acetato de carmín es extraído de la cochinilla,utilizada ampliamente como un agente colorante, por ejemplo, en los productos farmacéuticos, en los alimentos y últimamente en teñir cromosomas, se deriva de la materia colorante roja que se presenta en los cuerpos de los insectos hembras de Coccus cacti L., que crece sobre Nopalea coccinellifera y otras plantas de la familia Cactaceae, que se cultiva en las áreas desérticas de México y de América Centraly del Sur. Como tal, la cochinilla se recupera a partir de dichos insectos, extrayendo sus cuerpos secos con agua o alcohol. (Takahito, I. y col 2003)
Metodología
Se tomo un vaso pequeño de agua mineral con la cual se enjuago toda la boca para obtener muestra de ADN. Se vertió el agua mineral en un vaso de precipitado y se le agrego 25 mL de agua destilada y 25 mL de solución salina, la cualanteriormente se peso 1.25 g de sal en una bascula analítica.
Se añadió de 2 a 3 gotas de detergente líquido al 25% a la solución homogenizando con una cuchara quitando la espuma que generaba.
Con una jeringa de 50 mL se tomó alcohol al 96% muy frio hasta llegar a los 25 mL vertiéndolo de manera muy lenta y cuidadosa sobre la pared del vaso de vidrio de la muestra para obtener una doble capa, laseparación entre el agua con solución salina y el alcohol con la finalidad de que se condensara la o las muestras de DNA.
Una vez condensado el DNA se tomó con extremo cuidado con una pipeta Pasteur para ser trasladado a un tubo de Eppendorf® .
Para teñirlo se utilizo un colorante orgánico llamado carmín hidrosoluble negro al 50% y el otro acetato de carmín laca. Para los dos se llevo a cabo elmismo procedimiento
Se usó la balanza analítica para pesar 0.05 g del carmín. En un vaso de precipitado se agrego 4.5 mL de agua destilada y 5.5 mL de ácido acético, juntos se vertieron a un tubo de ensayo y se les puso a calentar en baño maría hasta alcanzar el punto de ebullición en el equipo Soxhlet.
Llegando a este punto se saco y se le agregando los .05 g de carmín dejándolo hacer...