extracción de la tirosina

RESUMEN
Se obtuvieron los extractos enzimáticos de tirosinasa en los frutos (banano, manzana y papa) y se procede a hacer los ensayos de la medida de actividad enzimática en condiciones normales, aumento de temperatura (extracto en baño de agua hirviendo) y presencia de un inhibidor (adición de ácido ascórbico) siguiendo el curso de la ración al interpretar las absorbancias que arroje elfotocolorímetro.
En la práctica se usó la tirosinasa extraída de banano, manzana y papa para ponerla a actuar con el sustrato L-DOPA para finalmente convertirlo en Dopa-Cromo mediante la acción de la enzima cuya concentración puede seguirse usando fotocolorimetría a un λ de 420 nm. Que es donde presenta su máxima absorción.
El procedimiento de cinética se realizó midiendo 9 lecturas de absorbanciaspor nueve minutos en diluciones a diferentes concentraciones de sustrato con extracto enzimático.

INTRODUCCIÓN
Todos notamos el oscurecimiento que se da en algunos alimentos si los dejamos expuestos al ambiente Este fenómeno es llamado pardeamiento enzimático es causado por la acción de un catalizador biológico; el cual es la enzima tirosinasa que oxida al aminoácido tirosina.
OBJETIVO
•Extraer la enzima tirosinasa de diferentes fuentes (banano, manzana y papa) para luego determinar la actividad de la tirosinasa, usando como sustrato L-DOPA, bajo diferentes condiciones: calentamiento y presencia de un inhibidor.














RESULTADOS:

1.1 Medida de la actividad enzimática a condiciones normales
En este experimento se midió la absorbancia de la muestra conel fin de determinar la acción del
extracto enzimático sobre el sustrato L-DOPA en condiciones normales.
Los datos obtenidos de las mediciones de absorbancia a una longitud de onda de 420 nm de la muestra con extracto de banano se presentan en la siguiente tabla.


Condiciones normales
t banano papa manzana
0 0,067 0,034 0,203
1 0,12 0,081 0,203
2 0,172 0,139 0,205
3 0,224 0,1970,206
4 0,278 0,25 0,208
5 0,324 0,302 0,209
6 0,365 0,347 0,209
7 0,395 0,385 0,201
8 0,424 0,417 0,212


1.2 Medida de la actividad enzimática al cambio de temperatura
En este experimento se midió la absorbancia de la muestra después de que los extractos enzimáticos fueran puestos en un baño de agua caliente por 5 minutos con el fin de determinar su acción sobre el sustrato L-DOPA.3.2.1. Los datos obtenidos de las mediciones de absorbancia a una longitud de onda de 420 nm de la muestra con extracto de banano se presentan en la siguiente tabla.

Cambio de temperatura
t banano papa manzana
0 0,025 0,097 0,096
1 0,039 0,103 0,096
2 0,041 0,102 0,1
3 0,042 0,105 0,101
4 0,03 0,1 0,097
5 0,027 0,094 0,096
6 0,027 0,101 0,095
7 0,021 0,102 0,092
8 0,023 0,098 0,0891.3. Medida de la actividad enzimática con presencia de un inhibidor
En este experimento se midió la absorvancia de la muestra después de que los extractos enzimáticos frente a la acción de un inhibidor (acido ascórbico).
3.3.1. Los datos obtenidos de las mediciones de absorbancia a una longitud de onda de 420 nm de la muestra con extracto de banano se presentan en la siguiente tabla.

Coninhibdor
t banano papa manzana
0 0,083 0,538 0,409
1 0,079 0,69 0,407
2 0,076 0,732 0,407
3 0,078 0,737 0,407
4 0,082 0,729 0,407
5 0,073 0,721 0,407
6 0,076 0,713 0,405
7 0,076 0,704 0,405
8 0,068 0,692 0,406






1.4 Cinética de michaelis menten
Tabla absorbancias a diferentes concentraciones de sustrato
Absorbancias a diferentes concentraciones de sustrato
tiempo 4mM8mM 12mM 16mM 20mM
0
1 0,07 0,111 0,125 0,115 0,123
2 0,09 0,132 0,149 0,138 0,154
3 0,102 0,149 0,173 0,169 0,185
4 0,115 0,166 0,198 0,19 0,218
5 0,13 0,183 0,217 0,217 0,247
6 0,142 0,204 0,236 0,2356 0,27
7 0,15 0,221 0,256 0,25 0,295
8 0,163 0,232 0,276 0,269 0,32
m 0,01292857 0,01754762 0,02142857 0,0222 0,02819048
Veloci-dad 0,01221429 0,01721429 0,02089286 0,02145 0,0275...