Extraccion de adn

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EXTRACCIÓN DE ADN DE SANGRE TOTAL

1. OBJETIVO Esta guía tiene por objeto describir las pautas, recomendaciones generales y principios para la extracción del ADN genómico, a partir de célulasnucleadas eucariotas. 2. RESPONSABLE Los responsables de la ejecución de la práctica de PCR son los estudiantes de medicina, liderados por su docente(s). 3. DEFINICIÓNES • ADN: Ácido Desoxiribonucleico.Material genético de todos los organismos celulares y casi todos los virus. El ADN lleva la información necesaria para dirigir la replicación y síntesis de proteínas. En casi todos los organismos el ADNestá organizado en forma de cromosomas, situados en el núcleo de la célula. • E.D.T.A: Ácido Etilen diamino tetra acético • Detergente: Los constituyentes de los detergentes suelen denominarseagentes de superficie activa o surfactantes, pues actúan sobre una superficie. Una propiedad común de los detergentes es que están formados de moléculas relativamente grandes, de una masa molecular superiora 200 D. Una parte de la molécula es soluble en materiales orgánicos y la otra en agua. 4. FUNDAMENTO El núcleo es extraído de la célula por diferencia de presión osmótica entre la célula y el medio,los detergentes orgánicos, destruyen los lípidos al nivel de la membrana plasmática y exponen al ADN en un medio de altas concentraciones de sal que nos permita separar al ADN del resto de loscomponentes con ayuda de agentes químicos. La precipitación de restos de membrana y proteínas que contaminen el ADN, nos permite obtener Biomoléculas disueltas, entre ellas al ADN libre de proteínasHistonas y no Histonas.

5. REACTIVOS • Buffer A: 0,32M de sacarosa; 10mM de Tris-HCL (pH 7,6); 5mM MgCl2 • Buffer B: 25 mM de E.D.T.A. (pH 8,0); 75mM NaCl. • 3M de Acetato de Sodio o 10M de Acetato deAmonio o 5M Cloruro de Sodio. • E.D.T.A. al 1,5% como anticuagulante. • Isopropanol o etanol absoluto. • Buffer T.E. • S.D.S. al 10% • Etanol al 70%. 6. MATERIALES Y EQUIPOS • Jeringa de 5ml. • 2 a 5...
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