Extraccion Del Adn

Extracción de ADN

1. OBJETIVOS
 Aprender y aplicar una técnica sencilla de extracción del ADN de un tejido animal.
 Realizar la extracción del ADN presente en las células del hígado de pollo.
 Observar y reconocer la estructura fibrilar del ADN.

2. MARCO TEÓRICO
El ADN se compone de dos cadenas, cada una formada por nucleótidos. Cada nucleótido, a su vez, está compuesto por un azúcarde 5 carbonos (desoxirribosa), un grupo fosfato y una base nitrogenada. Las bases nitrogenadas son cuatro: adenina (A), timina (T), citosina (C), y guanina (G), y siempre una A se enfrenta a una T, y una C se enfrenta a una G en la doble cadena. Las bases enfrentadas se dice que son complementarias. El ADN adopta una forma de doble hélice, como una escalera caracol donde los lados son cadenas deazúcares y fosfatos conectadas por "escalones", que son las bases nitrogenadas. La molécula de ADN se asocia a proteínas, llamadas histonas, y se encuentra muy enrollada y compactada para formar el cromosoma. Esta asociación de ADN y proteínas se conoce como cromatina. La cromatina puede estar enrollada en mayor o menor grado, dependiendo de la etapa en que se encuentra la célula; por ejemplo,cuando el ADN se ha duplicado antes de que la célula se divida, la cromatina se compacta en su mayor grado, y como resultado se pueden visualizar los cromosomas duplicados al microscopio como corpúsculos con forma de X.

2.1 FUNDAMENTO DEL ENSAYO
El objetivo de la prueba es la extracción de ADN presente en las células del hígado de pollo. Para ello debemos provocar la ruptura de los tejidos, elestallido de los núcleos y la separación de las proteínas asociadas al ADN. Los diferentes pasos de esta técnica van cubriendo estas etapas.
La extracción de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones salinos son atraídos hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolución y posterior extracción de la célula. Se empieza por lisar (romper) las células mediante undetergente, vaciándose su contenido molecular en una disolución tampón en la que se disuelve el ADN. En ese momento, el tampón contiene ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos, proteínas y otras sustancias en menor proporción. Las proteínas asociadas al ADN, de gran longitud, se habrán fraccionado en cadenas más pequeñas y separadas de él por acción del detergente. Sólo queda,por tanto, extraer el ADN de esa mezcla de tampón y detergente, para lo cual se utiliza alcohol isoamílico, probablemente el único reactivo de esta práctica que no suele haber en una cocina.

3. MATERIALES Y REACTIVOS


3.1 MATERIALES






TUBOS DE ENSAYO BICKERS PIPETAS MICROPIPETAS





GRADILLA BOMBILLA PICETA GUARDAPOLVO


GUANTES EMBUDO Y PAPEL FLITRO MORTERO Y PILÓNHÍGADO DE POLLO



3.2 REACTIVOS




Solución de NaCl (2 M) Solución de detergente al 20% (10 g/50 mL) Alcohol de 96° Agua destilada




3.3 METODOLOGÍA

3.3.1 EXTRACCIÓN DE ADN EN CÉLULAS ANIMALES
 Protocolo de trabajo
El objetivo de la presente práctica de Laboratorio es la extracción del ADN presente en las células del hígado de pollo. Para ello, se deberá provocarla ruptura de los tejidos, el estallido de los núcleos y la separación de las proteínas asociadas al ADN. Los diferentes pasos de esta técnica, descritos a continuación, van cubriendo las etapas anteriormente mencionadas:


1) Pesar 10 g de hígado de pollo.


2) Triturar, agregando 50 mL de agua destilada durante el proceso.


3) Filtrar el producto de la trituración.


4) Extraercon una pipeta, 2.5 mL del producto del filtrado y verterlo en un tubo de ensayo.

5) Adicionar 2.5 mL de la solución de NaCl (2 M).


6) Añadir 100 uL de solución de detergente (al 20%).


7) A continuación, adicionar con cuidado y por las paredes del tubo 5 mL de alcohol de 96° (etanol).




4. RESULTADOS

4.1 OBSERVACIÓN DE RESULTADOS

En las fotografías apreciaremos...