EXTRACCION DEL ADN



UNIVERSIDAD CATÓLICA DE VALENCIA
“San Vicente Mártir”

PRÁCTICA 2. EXTRACCIÓN DEL ADN


Presentado por:



Profesor/a:

Dª DOLORES PLANES

Asignatura: BIOQUÍMICATorrent, martes 11 de noviembre de 2014










Objetivo:

1. El objetivo de esta práctica es utilizar unas sencillas técnicas para poder extraer el ADN de un tejido animal y por el aspectoque presenta, confirmar su estructura fibrilar.
2. A partir de la longitud enorme de las fibras también se confirma que en el núcleo el ADN se encuentra replegado.

Materiales:
Hígado de polloVarilla de vidrio
Mortero
Vaso de precipitados
Pipeta
Probeta
Alcohol de 96%
Cloruro de sodio 2M
Arena
Tela para filtrar
Jabón
Azul de metileno
Balanza digital
Agitador electrónicoProcedimiento experimental:

Coger un trozo de hígado y machacarlo en un mortero. Se recomienda añadir arena para romper las membranas celulares, quedando los núcleos sueltos. A continuación añadir 50mlde agua destilada en la probeta y remover hasta hacer una especie de papilla. Posteriormente se filtra con una tela y se vierte en un vaso de precipitados.
Una vez filtrado se añade cloruro de sodio2M en 50 ml, para producir la liberación de las fibras de cromatina. M=n/V; 2M=n/0.05L; n=0.1mol
0.1mol NaCl*58.5g/1mol NaCl=5.85g NaCl para 50ml de agua. Para realizar la medida del NaCl tomamos unrecipiente y lo colocamos en la balanza dándole a tara para que mida desde 0 y a continuación ponemos la sal antes nombrada.
A continuación se añaden unas gotas de jabón, el cual forma un complejo conlas proteínas para separarlas del ADN, quedando el ADN libre de las proteínas que tiene asociadas. Posteriormente se añade mediante una pipeta 50ml de alcohol 96% de forma que éste resbale por lasparedes del vaso formándose dos capas.
Cuando estas capas estén bien diferenciadas se coge una varilla y se da vueltas para que las fibras de ADN se enrollen a dicha varilla, quedando como un...