Fluoresceína

PRACTICA No. 13
SÍNTESIS DE LA FLUORESCEÍNA
Objetivo:
Se sintentizará un poliheterociclo con características fluorestes.

Fundamento:
La fluoresceína fue descubierta por el químico profesor y premio Nobel de Química Johann Friedrich Wilhelm Adolf von Baeyer en 1905.
La fluoresceína es una sustancia de la familia de las xantinas, es una sal de sodio de resorcinol ftaleína. Tienepropiedades colorantes y fluorescentes. Es soluble en agua y la colorea de amarillo. Cuando se encuentra en soluciones de pH mayor a cinco, su color se torna verde y altamente fluorescente. Gracias a sus dobles enlaces conjugados, es capaz de captar un fotón de alta energía y devolverlo como fotón de baja energía.
Dicho en otras palabras, la fluoresceína capta luz en cierta longitud de onda, y emite luz enuna longitud de onda más larga. La energía disipada en el proceso se traduce en calor (vibraciones de las moléculas). Es un proceso que sucede en un muy corto lapso, del orden de millonésimas de segundo.
La fluoresceína tiene varias aplicaciones, se usa para el estudio de los vasos sanguíneos en el ojo, y para detectar lesiones en la córnea. También es utilizada para detectar alteraciones en ellacrimal. La fluoresceína se inyecta en el torrente sanguíneo, en alguna vena periférica. Con esta tinción es posible localizar anormalidades que pudiera haber en los vasos de la retina y del iris.
Para detectar lesiones en la córnea, se coloca un trozo de papel secante embebido en fluoresceína sobre la superficie del ojo. Cuando se proyecta luz azul sobre el ojo, la fluoresceína se estimulará yemitirá luz, dejando en evidencia cualquier lesión que pudiera existir en la córnea.
La fluoresceína es también utilizada en diferentes técnicas de laboratorio clínico, para la realización de distintos estudios.
Por ejemplo, en las técnicas de inmunofluorescencia directa o indirecta, se utilizan anticuerpos conjugados con fluoresceína, para que puedan ser detectados al ser observados en unmicroscopio especial, que emite luz en una longitud de onda muy corta (ultravioleta) a fin de estimular la fluoresceína. Además, esta sustancia también se utiliza en técnicas ELISA (enzimo-inmuno-ensayo), donde también se utilizan anticuerpos marcados con fluoresceína.
En esta práctica el heterociclo ha sintetizar se obtiene por una reacción de sustitución electrofilíca aromática del resorcinol, enmedio ácido.
Material:
Matraz erlenmeyer 100mL
Pipeta de 5mL
Pipeta de 1mL
Termómetro
Agitador magnético
Parrilla de calentamiento
Probeta de 100mL
Matraz kitazato
Embudo Buchner

Reactivos:
Anhídrido ftálico
Resorcinol
Agua
Ácido sulfúrico
Etanol

Cálculos previos:
Moles de anhídrido ftálico:
5mmol(1mol/1000mmol)(148.14g/1mol)=0.74g

Moles de resorcinol:10mmol(1mol/1000mmol)(110g/1mol)=1.1g

Procedimiento:
En un matraz erlenmeyer de 100mL, colocar 10mmol de resorcinol, 5mmol de ácido ftálico, antes de vaciarlos al matraz pulverizarlos, después colocar esto en el matraz y agregar 5ml de agua y 0,25mL de ácido sulfúrico concentrado.
Calentar con agitación entre 130-140°C durante 30min, o cuando adquiera coloración rojiza.
Adiciones la mínimacantidad de etanol necesaria para disolver el sólido, y posteriormente colocar 40-50mL de agua fría.
Filtrar el precipitado y lavar con agua fría.
Recristalizar con etanol-agua.

Observaciones:
La solución se vuelve de color amarillo, tardó mucho en cambiar de color, al principio cambio a color marrón y luego color rojo por la orillas, la solución se tornó completamente roja, se formó unamasa, tenía una consistencia de pintura, fue difícil disolver con etanol, pues la masa estaba pegada. Filtramos y quedaron un polvo como color arena, recristalizamos con etanol agua 1:1 y se formó una solución de color rojo, y al filtrarla quedó un polvo fino de color rojo.
Cuando estábamos lavando el material, se obervan una coloración amarillo-verde fluorescente, y para comprobar que el...