Fraccionamiento Celular

Fraccionamiento celular
El fraccionamiento celular permite separar los componentes de las células y consiste en la lisis de las celular procurando hacer el menor daño posible sobre esta y susestructuras (homogeneización) para posteriormente aplicar una centrifugación y así obtener porciones de la muestra enriquecidas en ciertos componentes que son el blanco a estudiar. La lisis celular se puedellevar a cabo mediante procesos de homogeneización mecánicos, físicos, químicos o enzimáticos, esto en función del objetivo de estudio; la centrifugación se basa en la diferencia de sedimentación delas partículas que difieren en densidad, tamaño y forma, la sedimentación depende del campo centrífugo aplicado, expresado en múltiplos de fuerzas g.
El método más utilizado para la separar loscomponentes celulares en fracciones es la centrifugación diferencial que se caracteriza por aplicar sucesivas centrifugaciones variando el tiempo y la fuerza centrífuga, de modo que los organelos de mayortamaño, peso y densidad sedimentan primero, posteriormente al aplicar otra centrifugación sedimentarán los de menor tamaño hasta el punto de la obtención del citosol que es un líquido complejo.Factores para elegir un buen buffer a la hora de homogeneizar:
* Solvente con agua.
* pH acorde a la muestra o sistema.
* Concentración de electrolitos.
Técnicas de lisis celular(homogeneización):
Mecánicos
* Mortero para tejidos duros.
* Virtis para tejidos semiduros.
* Potter para tejidos blandos.

Físicos
* Sonicación.
* Se usan vibraciones sonoraspara romper la integridad celular.
* Expulsión a alta presión
* Se forza a pasar a la célula por una cavidad extremadamente pequeña con mucha presión, hasta provocar su lisis.
Químicos
*Choque osmótico
* Se “juega” con soluciones hipotónicas e hipertónicas.
* Uso de detergentes
* Las moléculas anfipáticas del detergente se incrustan en la membrana y como las...