Fundamentos y técnicas de análisis microbiológicos

Fundamentos y técnicas de análisis microbiológicos Laboratorio de Diagnóstico Clínico. 2º curso

Técnicas de observación de microorganismos - 1 U.T. 13 -1 Bloque temático III

Técnicas de observación de microorganismos
El examen microscópico es el primer paso para el estudio de las muestras microbiológicas. Es un examen orientativo que nos proporciona datos como la presencia de bacterias, sumorfología, movilidad y características tintoriales y estructurales. Los microorganismos obtenidos a partir de una muestra clínica pueden verse vivos o muertos, aunque para la investigación de algunas características biológicas como la movilidad, es necesario observarlos vivos. Las técnicas de observación microscópica de microorganismos pueden dividirse en: A. B. Examen en fresco (preparacionessin teñir) - preparación entre porta y cubre Examen de preparaciones coloreadas: - de gérmenes vivos -> coloración vital - de gérmenes muertos -> tinciones Estudio de la movilidad bacteriana - gota pendiente

C.

A.

Examen en fresco (preparaciones sin teñir)

Consiste en observar los microorganismos vivos que puede haber en el producto examinado, sin fijación ni tinción, en suspensiónacuosa, pudiendo objetivar su cantidad, sus características morfológicas y su movilidad. Es una técnica de fácil realización, en la que el producto a examinar se sitúa entre porta y cubre. Si el material procede de una toma en medio sólido o de una toma directa, se emulsionará en una gota de agua destilada o solución salina. Si el material es líquido se depositará directamente entre porta y cubre. Elvolumen de la gota debe ser adecuado a las dimensiones del cubreobjetos ya que, en caso contrario, un exceso de líquido se traducirá en un desbordamiento de éste bajo los límites del cubre, o un cubre "flotante" que dificultará nuestra observación por la formación de corrientes líquidas. Si el producto va a permanecer mucho tiempo en el portaobjetos, es conveniente prevenir la desecación mediantela aplicación de parafina en los bordes inferiores del cubreobjetos. La observación se realiza, en general, con objetivo de 40x en microscopio de campo claro. La microscopía de contraste de fases y de campo oscuro facilita mucho la visión en fresco. Los exámenes en fresco permiten, además, observar la presencia de otros elementos formes, como leucocitos, cristales, etc., que pueden ser de granayuda en la valoración de las muestras.

Gustavo A. Díaz Martín.

Centro de Formación Profesional Instituto Villaverde

Curso 2009-2010

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Técnicas de observación de microorganismos - 2 U.T. 13 -1 Bloque temático III

B.

Examen de preparaciones coloreadas

Las técnicas de coloraciónpermiten la observación morfológica con un mejor contraste que en el examen en fresco, así como la observación de estructuras celulares. El examen microscópico de preparaciones teñidas tiene una serie de pasos comunes previos a la tinción, que son: Preparación del frotis: - La extensión del material sobre el portaobjetos se hará de diferentes formas, en función de la procedencia del producto a examinar.Si el producto es líquido, se depositará una pequeña (muy pequeña) cantidad de material en el centro del porta, extendiéndolo con el asa hasta conseguir una capa fina y homogénea. - Si la extensión debe hacerse a partir de un cultivo en medio sólido, la colonia que vayamos a estudiar se mezclará con una gotita de agua destilada estéril colocada en el centro del porta. Conviene recordar que no esnecesario depositar una gran cantidad de producto, pues se dificultaría la visualización, y que un exceso de agua solo contribuye a aumentar el tiempo en secar la preparación. - Por último, si el producto se ha recogido con una torunda (exudados) debe extenderse directamente sobre el portaobjetos, procurando que el algodón "ruede", en vez de "frotar" el porta; de esta manera se consigue...