Generalidades De La Espectrofotometria

Generalidades de la espectrofotometría
La espectrofotometría es el método de análisis óptico más usado en las investigaciones químicas y biológicas. El espectrofotómetros un instrumento que permite comparar la radiación absorbida o transmitida por una solución que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia.
Todas las sustanciaspueden absorber energía radiante, aun el vidrio que parece ser completamente transparente absorbe radiación de longitudes de ondas que no pertenecen al espectro visible; el agua absorbe fuertemente en la región del infrarrojo.
La absorción de las radiaciones ultravioletas, visibles e infrarrojas depende de la estructura de las moléculas, y es característica para cada sustancia química.
Cuando laluz atraviesa una sustancia, parte de la energía es absorbida; la energía radiante no puede producir ningún efecto sin ser absorbida.
El color de las sustancias se debe a que éstas absorben ciertas longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbidas.
La espectrofotometría ultravioleta-visible usa haces deradiación del espectro electromagnético, en el rango UV de 80 a 400 nm, principalmente de 200 a 400 nm y en el de la luz visible de 400 a 800 nm , por lo que es de gran utilidad para caracterizar los materiales en la región ultravioleta y visible del espectro.
Al campo de luz uv de 200 a 400 nm se le conoce también como rango de uv cercano , la espectrofotometría visible solamente usa el rango del campoelectromagnético de la luz visible , de 400 a 800 nm.
Además, no está de más mencionar el hecho de que la absorción y trasmitancia de luz depende tanto de la cantidad de la concentración como de la distancia recorrida.
Los triglicéridos, triacilglicéridos o triacilgliceroles son acilgliceroles, un tipo de lípidos, formados por una molécula de glicerol, que tieneesterificados sus tresgrupos hidroxilo por tres ácidos grasos, saturados o insaturados.
Los triglicéridos forman parte de las grasas, sobre todo de origen animal. Los aceites son triglicéridos en estado líquido de origen vegetal o que provienen del pescado.
Los ácidos grasos están unidos al glicerol por el enlace éster:
CH2COOR-CHCOOR'-CH2-COOR"
donde R, R', y R" son ácidos grasos; los tres ácidos grasos pueden ser diferentes,todos iguales, o sólo dos iguales y el otro distinto.
R1-COOH + R2-OH <----> R-COO-R2 + H2O
ácido carboxílico (= ácido graso) + alcohol (= glicerol) <-----> triglicérido + agua.
La longitud de las cadenas de los triglicéridos oscila entre 16 y 22 átomos de carbono.

Resultados y cálculos

1. Centrifugación de las muestras

Fig. 1. Muestra cuando los tubos de sangre erancentrigugados por 3 minutos a 3500 rpm.


2. Observación de la muestra después de ser centrifugada


Fig. 2- Se observa una de las muestras con el suero en la parte de arriba luego de haberla centrifugado.


3. suero en baño maría

Fig.3-se observan los tubos que contienen el suero en la incubadora a 37°

4. medición en el espectrofotómetro

Fig.4 en esta imagense elegía el método fotométrico y la longitud de onda para realizar la lectura de la concentración de triglicéridos.

Cálculos para obtener la Concentración
[ ] mg/ dL =A(muestra)A(patron)×200
[ ] mg/ dL =A90.82A90.82×200
[ ] mg/ dL = 200
Cuadro #1. Determinación de triglicéridos a través del uso del espectrofotómetro.
Nº de tubos | Rotulación | Absorbancia | Concentracion [ ] mg/ dL|
1 | Blanco | 0,000 | 0 |
2 | Estándar | 0,07 | 200 |
M1 | | 0,033 | 80.48 |
M2 | | 0,059 | 143.90 |
M3 | | 0,056 | 136,58 |
M4 | | 0,083 | 202,43 |
M5 | | 0,148 | 360,97 |
Fig. 3- Detalla los datos de absorbancia usando el espectrofotómetro y a partir de esta se obtuvieron los datos de tramitancia y concentración para cada muestra.

Discusiones

Para poder obtener las...