Gram

GENERALIDADES

Como ya lo hemos estudiado anteriormente la tinción de gram es uno de los métodos de tinción más importantes en el laboratorio bacteriológico y con el que debemos estar perfectamente familiarizados. Su utilidad práctica es importantísima en el medio en el cual nos desenvolvemos, en el trabajo con el microscópico de rutina en el laboratorio podemos conocer la morfología bacteriana(cocos, bacilos, positivos, negativos, etc.), y estas se basan justamente en la tinción de Gram.

Esta tinción se denominada así por el bacteriólogo danés Christian Gram, quien la desarrolló en 1844. Sobre la base de su reacción a la tinción de Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos, Gram positivas y Gram negativas (en este caso, los términos positivo y negativo no tiene nada quever con carga eléctrico, sino simplemente designan dos grupos morfológicos distintos de bacterias).Las bacterias Gram-positivas y Gram-negativas tiñen de forma distinta debido a las diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares. La pared de la célula bacteriana sirve para dar su tamaño y forma al organismo así como para prevenir la lisis osmótica. El material de la paredcelular bacteriana que confiere rigidez es el peptidoglicano. La pared de la célula Gram-positiva es gruesa y consiste en varias capas interconectadas depeptidoglicano así como algo de ácido teicoico. Generalmente, 80%-90% de la pared de lacélula Gram-positiva es peptidoglicano. La pared de la célula Gram-negativa, por otro lado, contiene una capa mucho más delgada, únicamente de peptidoglicano y estárodeada por una membrana exterior compuesta de fosfolípidos, lipopolisacáridos, y lipoproteínas. Sólo10% - 20% de la pared de la célula Gram-negativa es peptidoglicano. Debido a su importancia en taxonomía bacteriana y a que indica diferencias fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias, en la siguiente práctica explicaremos con gran detalle la tinción de gram y su funcionamiento;así como también la técnica para poder llevarla a cabo. Las células gram positivas, a causa de sus paredes celulares más espesas (tienen más peptidoglicano y menos lípido), no son permeables al disolvente ya que éste deshidrata la pared celular y cierra los poros, disminuyendo así el espacio entre las moléculas y provocando que el de complejo cristal violeta-yodo quede atrapado dentro de la paredcelular.

Con las células Gram negativas se utiliza una coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina básica. Después de la coloración de contraste las células Gram negativas son rojas, mientras que las Gram positivas permanecen azules. El carácter de gram positivo no es siempre un fenómeno del todo o nada. Algunos organismos songram-variables, es decir, unas veces gram positivos y otras gram negativos.

DESARROLLO

Material:

Laminas portaobjetos
Cubreobjetos
Palillos
Microscopio Óptico
Encendedor
Puente para tinciones
Goteros
Lápiz graso

Reactivos:

Solución de cristal violeta
Solución de yodo-lugol
Solución de alcohol-acetona
Solución de safranina

Procedimiento:

1. En la lamina portaobjetos trazaruna ovalo con el lápiz graso.
2. Colocar una gota de agua en el portaobjetos. Con un palillo tomar una pequeña muestra de nuestro sarro bucal.
3. Fijamos la preparación al calor, pero sin calentar demasiado el portaobjetos.
5. Al portaobjetos cubrirlo con cristal violeta durante 60 s. Tirar el exceso de colorante y lavar al chorro de agua indirectamente.
6. Al portaobjetos cubrirlo conyodo-lugol durante 60 s. Tirar el exceso de mordente y lavar al chorro de agua indirectamente.
7. Al portaobjetos cubrirlo con alcohol-cetona durante 45 s. Tirar el exceso de decolorante y lavar al chorro de agua indirectamente.
8. Al portaobjetos cubrirlo con safranina durante 60 s. Tirar el exceso de colorante y lavar al chorro de agua indirectamente.
9. Dejar secar al aire.
10. Mirar al...