historia del peru

BILIRRUBINA TOTAL (DMSO)
Reactivo líquido para la determinación fotométrica de
Bilirrubina Total en suero o plasma.

Para uso en el diagnóstico in Vitro.
SIGNIFICANCIA CLINICA
La bilirrubina es producto de la degradación de la hemoglobina en el
sistema retículo endotelial, la cual es transportada al hígado unida a
albúmina. Esta bilirrubina, conocida como bilirrubina indirecta o libre,es insoluble en agua y es conjugada en el hígado con ácido glucurónico,
siendo excretada hacia el intestino por vía biliar, donde es metabolizada
por la flora bacteriana. La bilirrubina total corresponde a la suma de la
bilirrubina indirecta o libre, y la bilirrubina conjugada o directa. Un
aumento en la bilirrubina total es producto de una obstrucción en la vía
biliar; hepatitis; cirrosis;enfermedad hemolítica y algunas deficiencias
enzimáticas hereditarias. La bilirrubina indirecta o libre, se encuentra
elevada por causas pre-hepáticas, tales como enfermedades
hemolíticas, o bien problemas metabólicos intra-hepáticos que
involucran el proceso de conjugación. En neonatos es importante el
control de la bilirrubinemia, ya que la bilirrubina indirecta o libre es
neurotóxica.MATERIAL NECESARIO NO INCLUIDO

FUNDAMENTOS DEL METODO

Muestra

La mayoría de los métodos utilizados para la determinación de
bilirrubina utilizan ácido sulfanílico diazotizado, formándose
azobilirrubina coloreada. En medio acuoso sólo reacciona la bilirrubina
conjugada o directa; para medir la bilirrubina total es necesario la
incorporación de un acelerador, inicialmente se utilizómetanol (MalloyEvelyn), y posteriormente benzoato de sodio (Jendrassic-Grof). El
método VALTEK® se basa en la modificación propuesta por Walters y
Gerarde, en la cual se utiliza como acelerador DMSO. La azobilirrubina
formada es medida fotométricamente entre 540 y 600 nm, siendo la
intensidad del color formado directamente proporcional a la cantidad
de bilirrubina directa o total presente en lamuestra.

Calibrador

Espectrofotómetro manual o automático o fotocolorímetro de filtros
con cubeta termoestable, capaz de medir absorbancia a 560 nm (rango
540 a 600 nm), baño termoregulado, cronómetro, pipetas, calibrador y
sueros controles.
TECNICA
Llevar el reactivo a la temperatura que se realizará el ensayo. Las
pipetas a utilizar deben estar limpias y libres de residuos para nocontaminar el reactivo.
TECNICA MUESTRA NORMAL
Desconocido
(ml)
(ml)

Blanco reactivo

----

----

----

0.10

----

Reactivo trabajo (ml)

1.00

1.00

1.00

Agua destilada (ml)

----

----

0.10

Mezclar e incubar 10 minutos a temperatura ambiente (20° a 25°C.) o 6
minutos a 37° C., llevando a cero el instrumento con el blanco reactivo.
El color resultante esestable por 30 minutos.

∆ Abs. = (Abs. Muestra) – (Abs. Blanco)

TECNICA MUESTRA RECIEN NACIDO
Desconocido

REACTIVOS
Muestra
Conservados entre 2° y 8°C. y protegidos de la luz, estables hasta la
fecha de caducidad indicada en la etiqueta.

Calibrador

0.10

(ml)

Calibrador

Blanco reactivo

----

----

Composición reactivo de trabajo:
Acido sulfanílico
HCl
DMSO
Nitritode sodio

30 mM
165 mM
5000 mM
0.50 mM

(ml)

----

Reactivo trabajo (ml)
Preparación reactivo de trabajo: Agregar al momento de utilizar, por
cada 1 ml. de reactivo DMSO, 1 gota de reactivo nitrito de sodio (o 0.05
ml.), mezclar. Estable por 24 horas protegido de la luz.

Calibrador

0.02

0.02

1.00

1.00

1.00

----

Agua destilada (ml)

----

----

0.02Mezclar e incubar 10 minutos a temperatura ambiente (20° a 25°C.) o 6
minutos a 37° C., llevando a cero el instrumento con el blanco reactivo.
El color resultante es estable por 30 minutos.

∆ Abs. = (Abs. Muestra) – (Abs. Blanco)

CALIBRACION

MUESTRA

•

Utilizar suero o plasma libre de hemólisis. Realizar el ensayo dentro de
un plazo no mayor a las 2 horas, en caso contrario...