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TEMAS DE EXPOSICION BIOLOGIA MOLECULAR
GRUPO UNO, LUNES 4.30- 6.30 PM

1. La PCR
1. Secuenciación del DNA (método de Sanger)


2. Polimorfismo SNP y su relación con las enfermedades
3. Farmacogenomica, Faramcogenetica y Polimorfismo SNP y su relación con el metabolismo de los medicamentos


Proteómica y desarrollo de medicamentos
4. Epigenesis


5. Bioinformatica6. Micro RNAs, RNA de interferencia y silenciamiento de genes

7. Microarray
8. Marcadores moleculares ( microsatélites STR, VNR), Pruebas de paternidad


9. Identificación de sitios de unión de factores de Trascripción



10. Enfermedades monogenicas


11. Enfermedades poligenicas
























METODO DE SANGER
El método dideoxi desecuenciación ideado por Sanger está basado en el empleo de didesoxinucleótidos que carecen de uno de los grupos hidroxilo, de manera que cuando uno de estos nucleótidos se incorpora a una cadena de ADN en crecimiento, está cadena no puede continuar elongándose ya que la ADN polimerasa necesita un extremo 3’ OH para añadir el siguiente nucleótido y el desosinucleótido incorporado carece de este grupohidroxilo.

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Se aísla y se clona el ADN que se desea secuenciar, este ADN se desnaturaliza y se emplea una sola hélice en la secuenciación. En la secuenciación se utiliza un cebador o “primer” marcado radiactivamente que suministra el extremo 3’OH que necesita la ADN polimerasa. Se preparan cuatro  tubos de reacción, cada uno con el ADN molde de hélice sencilla que se desea secuenciar, con ADNpolimerasa, con el cebador marcado y  con los cuatro nucleótidos trifosfato. A cada tubo se le añade una pequeña proporción de un didesoxinucleótido trifosfato , un tubo con ddATP, otro con ddTTP, el tercero con  ddGTP y el cuarto con ddCTP. En cada uno de estos tubos se producirán cadenas de ADN de distintas longitudes, terminando todas en el lugar en el que se incorporó el dideoxicorrespondiente añadido al tubo. 
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Posteriormente, estas piezas de ADN se separan mediante electroforesis vertical en geles de acrilamida. Las piezas más pequeñas migran más rápidamente que las grandes y la secuencia se puede leer directamente sobre el gel de acrilamida.
En el siguiente esquema se indican los resultados que obtendríamos al realizar la autorradiografía del gel de secuenciación :
[pic]Polimorfismo de nucleótido simple
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La cadena de ADN en 1 difiere de la del ADN en 2 en un sólo par de bases
 polimorfismo de un solo nucleótido o SNP (Single Nucleotide Polymorphism, pronunciado snip) es una variación en la secuencia de ADN que afecta a una sola base (adenina (A), timina (T), citosina (C) o guanina (G)) de una secuencia del genoma. Sin embargo, algunos autoresconsideran que cambios de unos pocos nucleotidos, como también pequeñas inserciones y deleciones (indels) pueden ser consideradas como SNP, donde el término Polimorfismo de nucleótido simple es más adecuado.1 Una de estas variaciones debe darse al menos en un 1% de la población para ser considerada como un SNP. Si no se llega al 1% no se considera SNP y sí una mutación puntual.

Los SNPconstituyen hasta el 90% de todas las variaciones genómicas humanas, y aparecen cada 1,300 bases en promedio, a lo largo del genoma humano. Dos tercios de los SNP corresponden a la sustitución de una citosina (C) por una timina (T). Estas variaciones en la secuencia del ADN pueden afectar a la respuesta de los individuos a enfermedades, bacterias, virus, productos químicos, fármacos, etc..

Los SNP quese localicen dentro de una secuencia codificante pueden modificar o no la cadena de aminoácidos que producen, se llama SNP no-sinónimos los primeros y SNP sinónimo (o mutación silenciosa) a los segundos. Los SNP que se encuentren en regiones no codificantes pueden tener consecuencias en el proceso de traducción, sobre todo en procesos como el splicing, la unión de factores de transcripción o...