Identificación Y Aislamiento De Entero Bacterias

INFORME N° 6
AISLAMIENTO DE ENTEROBACTERIAS

1.- OBJETIVOS:
- Aislar entero bacterias en medios adecuados y desarrollar la prueba de IMVLC.

2.- FUNDAMENTO TEÓRICO:
La familia enterobacteriaceae, esta formada por bacterias patógenas y no patógenas, su morfología es en forma de pequeños bastones, son Gram –negativos y fermentan glucosa. Las que tiene mayor importancia son las de losgéneros Escherichia, Shingella y Salmonella.
En el género Escherichia o coliformes se considera como indicador a E.coli de origen fecal, por su frecuencia. Son lactosa positivos, crecen a 37 °C a pH = 2- 7,4.
Las bacterias del genero Salmonella son lactosa negativas; crecen a 37°C, a pH = 7, 2, 6. A 65 °C mueren en 15 minutos y a 100°C en forma instantánea.
2.1.- CARACTERISTICAS:
En la definiciónclásica de una Enterobacteriaceae se usan siete criterios básicos, adicional a la aparición de nuevos métodos taxonómicos para incluir a ciertos géneros que no cumplen con todos los siguientes criterios, pero que forman parte de esta familia:
* Son bacterias gram negativas, la mayoría bacilos, otros cocobacilos y otros pleomórficos.
* No son exigentes, son de fácil cultivo.
* Son oxidasanegativo (excepto Plesiomonas, que es oxidasa positivo), es decir, carecen de la enzima citocromo oxidasa.
* Son capaces de reducir nitrato en nitrito.
* Son anaeróbicos facultativos.
Son fermentadores de carbohidratos en condiciones anaeróbicas con o sin la producción de gas (en especial glucosa y lactosa), y oxidadores de una amplia gama de substratos en condiciones aeróbicas.
Muchosgéneros tienen un flagelo que sirve para desplazarse, aunque algunos géneros no son móviles.
Adicional a ello, las Enterobacteriaceae no forman esporas, algunas producen toxinas y pueden ser encapsuladas y son organismos catalasa positivos. Son quimioheterótrofos, y necesitan para su crecimiento compuestos simples de carbono y nitrógeno, generalmente sólo con D-glucosa, aunque algunas requierenaminoácidos y vitaminas. La temperatura óptima de crecimiento es de entre 22 °C y 37 °C.
Las diferencias entre los nombres de los diversos géneros provienen de criterios más precisos, como la fermentación de los diferentes azúcares, la producción o no de azufre, la presencia de enzimas metabólicas (β-galactosidasa, desaminasas, descarboxilasas), etc. Los serotipos de importancia medica y sanitariapueden distinguirse entre sí por la presencia o ausencia de antígenos en su constitución celular, tales como en el lipopolisacárido (antígeno O), el antígeno flagelar (antígeno H) o el antígeno capsular (antígeno K).
3.- EQUIPOS Y MATERIALES :
* Estufa
* Autoclave
* Mechero
* Baño maría
* Asas bacteriológicas
* Placas Petri con medios de cultivo:
* EBM
* BPLS
*VRBA
* VRBA GLUCOSADO
* SS
* Tubos con caldos de:
* Enriquecimiento BRILLA
* Tetrationato inoculados
* Medios de cultivo para la prueba de :
* IMVIC

4.-PROCEDIMIENTO:

* Sembrar en estría del caldo brilla al VRBA y EBM.
* Sembrar en estría del caldo tetrationato al BPLS y SS.
* De ambos caldos pueden sembrar al VRBA glucosado.}
* Luego incubar alas temperaturas y tiempos adecuados realizar la prueba de IMVIC para una colonia representativa de E.Coli.

4.1.- PRUEBA DE INDOL:
* Inocular en tubos con caldo pretonado o triptosa.
* Incubar por 24 horas, adicionar de 2 a 3 gotas de reactivo de Kovacs por las paredes.
* Dejar los tubos en reposo y observar la formación de un anillo de color rojo para el resultado positivo, oanillo color amarillo par el negativo.

4.2.-PRUEBA DEL ROJO DE METILO:
* Inocular los tubos conteniendo caldo MR-VP.
* Incubar los tubos por 72 horas a 37°C.
* Después de 72 horas adicionar a 5 gotas de solución de rojo de metilo y agitar.
* Anotar el rojo de metilo positivo, la aparición de un color rojo, y como negativo la aparición de un color amarillo.

4.3.-PRUEBA DE...