Identificacion de enterobacterias

IDENTIFICACION DE ENTEROBACTERIAS

Martha Murcia Aranguren INTRODUCCIÓN Las pruebas bioquímicas se basan en la determinación de la presencia o ausencia de diferentes enzimas codificadas por el material genético del cromosoma bacteriano. Estas enzimas (catalasas, coagulasas, decarboxilasas, deaminasas, ureasas, peroxidasas, etc) involucradas en el metabolismo bacteriano, pueden ser evidenciadasen medios de cultivo especiales que contienen los substratos (DNA, hidratos de carbono, aminoácidos, etc) sobre los cuales ellas actúan, junto con un sistema indicador que va a poner de manifiesto la degradación del substrato o la presencia de un metabolito específico (ácido fórmico, ácido láctico, ácido succínico, indol, etc). Las pruebas bioquímicas también evalúan: la capacidad de reducirciertos iones (ferroso a férrico), la presencia o ausencia de flagelos (prueba de movilidad), la producción o no de hemolisinas, el requerimiento o no de algunos factores especiales (proteínas séricas), la producción o no de algunas toxinas con capacidad virulenta (toxina diftérica, toxina botulínica, etc). IMPORTANCIA CLINICA Cuando se han aislado las bacterias causantes de un proceso infeccioso,éstas deben ser identificadas hasta llegar a GENERO Y ESPECIE, para lograrlo se debe evaluar su actividad bioquímica o metabólica. Del microorganismo aislado dependerá el tipo de tratamiento que debe ser administrado al paciente. Las enterobacterias son las responsables del 50% de todos los aislamientos clínicamente significativos, producen el 50% de los casos de septicemia, del 60 al 70% de laenteritis bacterianas, el 90% de las infecciones urinarias. Son causa importante de infección nosocomial.

OBJETIVOS 1. Sembrar, leer e interpretar algunas pruebas bioquímicas útiles en la identificación de bacterias bacilares Gram negativas. 2. Determinar género y especie de la cepa problema.

MATERIALES • • Cepas bacterianas: cepas de bactérias bacilares Gram negativas Médios de cultivo: Agar TSI(triple azúcar hierro), agar LIA (lisina, hierro, agar) agar UREA, agar CITRATO DE SIMMONS, caldo MR (rojo metilo), caldo VP (voges proskauer), caldo FENIL ALANINA-malonato, medio SIM (sulfuro, indol, movilidad), medio OF GLUCOSA (oxidación, fermetación).

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•

Otros: reactivo de oxidasa (dimetil para fenilne diamina o tetrametil para feniline diamina), aceite mineral, rojo de metilo,reactivo de Erlich, KOH 40%, alfa naftol 5%, cloruro férrico 10%.

MÉTODOS • Sembrar la cepa problema en toda la batería disponible de acuerdo a la siguiente instrucción: central hasta el fondo del

1- AGAR TSI: siembre el agar TSI haciendo una punción tubo y estría en superficie.

Principio: en TSI se determina la capacidad de un microorganismo para atacar los hidratos de carbono GLUCOSA,LACTOSA y/o SACAROSA, con producción o no de gases (CO2 y H2), junto con la producción o no de ácido sulfhídrico (H2S). Lectura: se efectúa después de 18 a 24 horas de incubación a 37°C. Se lee un quebrado, la reacción ocurrida en la superficie del medio corresponde al numerador (parte aerobia) y la reacción ocurrida en la profundidad del medio corresponde al denominador (parte anaerobia) La acidez sedenomina con la letra A (color amarillo) y la alcalinidad con la letra K (color rojo) Fundamento: en este medio se leen las siguientes reacciones bioquímicas: • Fermentación de la glucosa (K/A). • Fermentación de glucosa, lactosa y/o sacarosa (A/A) • No fermentación de los carbohidratos (K/K), la bacteria no utiliza los hidratos de carbono, produciendo aminas que alcalinizan el fondo y lasuperficie del medio. Algunas bacterias no fermentadoras solamente atacan la peptona aeróbicamente dando un TSI: K/N, es decir no hay cambio en el fondo del tubo. • Producción de gas: ruptura del medio. • Producción de H2S:ennegrecimiento del medio LECTURAS AGAR TSI

A/A K/A K/K A/A K/A

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El agar TSI tiene tres azúcares: glucosa (1 g/L), lactosa (10 g/L) y sacarosa (10 g/L). Como indicador de...