identificacion bioquimica enterobacterias

La identificación bioquímica debe hacerse partiendo de un cultivo puro o colonias perfectamente aisladas. Tras observar la morfología de las colonias, el tipo de crecimiento en medio líquido, la morfología bacteriana y la tinción de Gram, se procede a la identificación empleando diversas pruebas bioquímicas.

Pruebas para cocos Gram positivos (frotis nasal):
• Catalasa
• Coagulasa

Pruebaspara bacilos Gram negativos (orina):
• TSI
• Urea

Prueba de catalasa: Los microorganismos que tienen la enzima catalasa descomponen el agua oxigenada en agua y oxígeno. Al depositar sobre una colonia bacteriana (de un medio sin sangre) una gota de agua oxigenada se observarán burbujas (de oxígeno) si la bacteria produce catalasa.

Prueba de coagulasa: La coagulasa es una enzima que tienela facultad de coagular las proteínas séricas del plasma. Se utiliza para la identificación de estafilococos.

Composición del medio: Infusión cerebro-corazón, TSA, manitol, púrpura de bromocresol y suero humano.

Forma de siembra: Tomar una colonia y hacer una estría radial en la placa.

Lectura: Los microorganismos que son coagulasa y manitol positivos dan un cerco amarillo conprecipitado. Los que fermentan el manitol pero son coagulasa negativos dan un halo amarillo pero no precipitado. Los que no fermentan manitol y son coagulasa negativos, no producen ni halo ni precipitado.

TSI (Triple Sugar Iron): Composición: tres azúcares Glucosa (al 0.1%), Lactosa (al 1%) y Sacarosa (al 1%). más sulfato ferroso, tiosulfato sódico y rojo fenol como indicador. pH ácido  color amarillo;pH básico  color rojo.

Los microorganismos que fermentan la glucosa amarillean el medio sólo en la base, ya que la producción de ácido es limitada, al ser la concentración de glucosa en el medio muy baja. Los que además fermentan los otros azúcares lo amarillean tanto en la base como en el pico. Los no fermentadores hacen que el medio se vuelva más rojo.
También se puede observar laproducción de gas que se manifiesta por la formación de burbujas en el medio y la producción de SH2 a partir del tiosulfato a sulfhídrico y luego sulfuro ferroso que es de color negro.

Forma de siembra: Tomar una colonia aislada con un asa, pinchar el medio alcanzando la parte inferior del mismo; sacar el asa e inocular la superficie de la lengüeta.















Prueba de laureasa: La ureasa es una enzima que desdobla la urea produciendo amoníaco. Esta sustancia de naturaleza básica eleva el pH del medio haciendo virar el color del indicador de pH.

Composición: medio base, agar, urea y rojo fenol.

Forma de siembra: Extender la colonia sobre la lengüeta del medio.

Interpretación: Rosa  ureasa positivo. Amarillo  ureasa negativo.Concentración mínima inhibitoria (CMI), que es la menor concentración de antimicrobiano capaz de impedir el crecimiento de un microorganismo en unas condiciones normalizadas, y concentración mínima bactericida (CMB) que es la menor concentración de antimicrobiano capaz de destruir el 99,9% de una muestra inoculada en unas condiciones normalizadas.



Técnica de difusión con discos arealizar en prácticas:
Se prepara una suspensión bacteriana con una turbidez equivalente al 0,5 de McFarland en solución salina. Se introduce una torunda en dicha suspensión y con la torunda se hace una siembra en tapiz en la superficie del medio. Sobre ella se colocan los discos de antibióticos, que llevan una carga determinada. Se incuba a 37º C durante 18-24 horas.

• Prueba de la Oxidasa
Elobjetivo de la prueba “Oxidasa” es buscar la presencia de la enzima Citocromo C oxidasa.
Se trata de un enzima que oxida el citocromo C de la cadena transportadora de e-. Este se detecta utilizando el tetra para fenilendiamina: el reactivo de oxidasa contiene este compuesto que va a ser oxidado por la citocromo C oxidasa. En estado reducido es incolora, pero cuando se oxida vira a púrpura....