Inestabilitat Cromosòmica En Amniòcits De Fetus De Mares Fumadores

Inestabilitat cromosòmica en amniòcits de fetus de mares fumadores

Per Adrià Bellés García i Alba Bermúdez Moral

Context

En aquest treball s’analitza l’efecte del tabac en els amniòcits de fetus de mares fumadores, pel que fa referència a inestabilitat cromosòmica entesa com lesions (gaps i trencaments) i anomalies cromosòmiques estructurals. També s’analitza quines són les regionscromosòmiques més afectades pels efectes genotòxics del tabac. L’anàlisi s’ha realitzat sobre cèl•lules extretes per amniocentesi degut a que en altres estudis s’han trobat metabòlits derivats del tabac tant en la sang del fetus com en les cèl•lules del líquid amniòtic que podrien tenir efectes tòxics.

Disseny de l’experiment

Les dones que han participat en l’experiment estaven entre la 13º i la26º setmana de gestació. Les fumadores havien fumat durant més de 10 anys 10 cigarrets al dia i seguien fumant durant l’embaràs, en canvi les no fumadores no havien estat exposades al fum del tabac durant l’embaràs. Tant el grup de mares fumadores com el grup control han estat estrictament seleccionats per tal de que no hi hagi interferències provinents d’altres substàncies que puguin modificarels resultats, com alcohol, cafè i té, donant lloc a grups de 25 individus.

Amb les cèl•lules obtingudes per amniocentesi es van fer 4 cultius en cada cas, 2 en plaques de petri i dos més en tubs de plàstic per a cultiu. Les plaques de petri es van usar per fer el diagnòstic prenatal. Els cultius en tubs es van distribuir en 2 plaques de petri i es van preparar per fer observacions de cromosomesmetafàsics. Primer es van tenyir amb Leishman per avaluar la presència de gaps i trencaments en 100 metafases d’alta qualitat. Després, les mateixes preparacions es van destenyir i retenyir, aquesta vegada amb colorant Wright Giemsa per a observar les bandes G i així poder identificar a quines bandes es localitzaven els gaps i trencaments, i per identificar anomalies estructurals; en aquest cas esvan analitzar 25 metafases d’altra qualitat per cada placa de petri.

Tractament estadístic

S'ha usat com a biomarcador la presència d'inestabilitat cromosòmica i micronuclis en limfòcits de sang perifèrica; en persones fumadores la quantitat de micronuclis i anomalies cromosòmiques és major. Els tests estadístics que s’han emprat per analitzar les dades obtingudes són: GEE (equaciód’estimació generalitzada), “fragile site multinomial method”, X2 i G2. El GEE s’ha fet servir per detectar diferències entre el grup de fumadors i el grup control en cada una de les inestabilitats cromosòmiques observades; els avantatges d’usar aquest sistema són que té en compte la correlació de les mostres que provenen d’un mateix individu i que permet afegir altres variables rellevants com a covariants.El “fragile site multinomial method” va ser usat per identificar els llocs fràgils no produïts de manera aleatòria respecte el total de llocs fràgils en el total d’individus analitzats (control i fumadors). X2 i G2 van ser usats per saber si hi havia diferències significatives en les bandes afectades per les diferents anomalies en els dos grups.

Finalment per identificar les bandes amb méssensibilitat de trencament en els fumadors respecte al grup control es va crear una variable (SD) definida com el número de trencaments en el grup de fumadors menys el número de trencaments del grup control. Les bandes amb valors positius tenien més tendència a trencar-se en els fumadors i aquelles amb valors negatius indicaven el contrari. Aquells casos en que el valor era superior a 3 SDs erenconsiderats extrems.
Resultats

L’edat materna en el grup de fumadors és significativament superior en les mares fumadores. En un principi, l’edat materna està relacionada amb anomalies numèriques i no estructurals amb la qual cosa no hauria d’afectar als resultats de l’estudi, tal com s’ha observat en fer un test de correlació entre l’edat materna i la inestabilitat cromosòmica. També s’ha...