Informe 12 Final

Universidad Nacional Andrés Bello
Faculta de Ecología y Recursos Naturales
Departamento de Ciencias Químicas
Escuela de Química y Farmacia









LABORATORIO Nº 12:
Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC). Determinación de Teofilina en una muestra problema.
















Integrantes: Vanessa Pacheco
Ezequiel Rivas
Profesor: Beatriz Sepúlveda
Fecha deentrega:viernes 9 de noviembre de 2012
Sección: 6

INTRODUCCION

En la cromatografía líquida, la fase móvil es un líquido que fluye a través de una columna que contiene a la fase fija. La separación cromatográfica en HPLC es el resultado de las interacciones específicas entre las moléculas de la muestra en ambas fases, móvil y estacionaria
A diferencia de la cromatografía de gases, lacromatografía de líquidos de alto rendimiento (HPLC, de high-performance liquidchromatography) no está limitada por la volatilidad o la estabilidad térmica de la muestra.
La HPLC es capaz de separar macromoléculas y especies iónicas, productos naturales lábiles, materiales poliméricos y una gran variedad de otros grupos polifuncionales de alto peso molecular. Con una fase móvil líquida interactiva, otroparámetro se encuentra disponible para la selectividad, en adición a una fase estacionaria activa.
La HPLC ofrece una mayor variedad de fases estacionarias, lo que permite una mayor gama de estas interacciones selectivas y más posibilidades para la separación (1).
Los objetivos planteados para este práctico son:
Conocer y manejar un equipo HPLC y determinar el contenido de Teofilina en una muestraproblema.




MATERIALES Y REACTIVOS

Cromatografo HPLC
Fase móvil (30:70=metanol:agua)
Patrón de teofilina
Patrón de teobromina (estándar interno)
Metanol calidad HPLC
Agua mili-Q o nanopure
Matraces aforados 50mL



PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Determinación de la concentración de Teofilina, en una muestra problema.
Se trabajó con una fase móvil isocrática (30:70 = Metanol:Agua), a un flujo de 1mL/min y se utilizó una longitud de onda de detección de 260 nm, se determinó la concentración de teofilina en una muestra problema, se utilizó el método de estándar interno (10 ppm de teobromina), por interpolación en una curva de calibración, previamente medida se usaron patrones de teofilina de 5, 10, 12.5, 15 y 20 ppm.
Influencia del flujo de fase móvil
1 Te trabajó con el patrón de 10 ppm deteofilina, una fase móvil isocrática (30:70 = Metanol:Agua), a un flujo de 1 mL/min y se utilizó una longitud de onda de detección de 260 nm, se trabajó a los siguientes flujos de fase móvil : 0.8, 0.9, 1.0, 1.1, 1.2 mL/min














RESULTADOS
Tabla 1: “Datos para la determinación de la concentración de Teofilina, en una muestra problema”
Teofilina [ppm]
Teobromina [ppm]
Teofilina
TeobrominaArea
Tiempo de Retencion [min]
Area
Tiempo de Retencion [min]
5
10
1919046
5,71
348303
4,31
10
10
4344838
5,727
388505
4,327
12,5
10
4693671
5,723
345553
4.32
15
10
5042503
5,735
302601
4,318
20
10
7244972
5,802
325937
4,36
Muestra Problema
10
13992
5,835
59665
4,368
Muestra Problema
10
8024
5,835
62762
4,368
Muestra Problema
10
15294
5,81
76395
4,352

Tabla 2: “Datos para realizar la curva decalibración, método de estándar interno”


(ppm)

(ppm)








5
10
0,5
1919046
348303
5,509703
10
10
1
4344838
388505
11,18348
12,5
10
1,25
4693671
345553
13,58307
15
10
1,5
5042503
302601
16,66387
20
10
2
7244972
325937
22,22814














Gráfico 1: “Curva de calibración, método de estándar interno”



(Ecuación 1)


Para determinar la concentración de las muestras problemas, remplazamos enla ecuación (1), con lo que nos queda de la siguiente forma:

1)


2)


3)


Tabla 3: “Datos para la influencia del flujo de la fase móvil”

Flujo [mL/min]
Teofilina
Teobromina

Tiempo de Retencion [min]
W [min]
Tiempo de Retencion [min]
W [min]
0,8
6,935
1,7
5,302
1,45
0,9
6,335
1,2
4,768
1,35
1
5,71
1,88
4,285
1,23
1,1
5,018
1,46
3,918
1,01
1,2
4,96
1,59
3,71
1,08

Datos:

Flujo Curva...