informe de bioca 3

CADENA RESPIRATORIA Y FOSFORILACION OXIDATIVA

I. INTRODUCCION

La cadena respiratoria recibe ese nombre porque consiste en un complicado sistema de moléculas que toman átomos de hidrógeno y electrones de diferentes sustancias que las células obtienen de la degradación de los materiales con los que se nutren. A través de los componentes de la cadena respiratoria, estos hidrógenos y electronesviajan hacia el oxígeno, con el cual se combinan al final. En cierta forma, este proceso puede verse como la manera en la que las células llevan a cabo la combinación del oxígeno con el hidrógeno para formar agua, y es realmente lo que constituye la respiración celular. Pero en el proceso se puede obtener una cantidad muy grande de energía derivada, en términos muy sencillos, de la gran tendenciaque tiene el hidrógeno para unirse con el oxígeno, que todos conocemos.
La cadena respiratoria se realiza precisamente en las membranas de las mitocondrias de las células, o en la membrana externa de las bacterias. Como puede verse en la cuando los átomos de hidrógeno o en algunas partes de la cadena, los electrones que provienen de ellos viajan hacia el oxígeno, liberan una cantidad de energía, queen lugar de disiparse, se utiliza para mover hidrogeniones (H+) de un lado al otro de las membranas.

La transferencia de electrones en la cadena de transporte de electrones es energéticamente favorable porque el NADH es un poderoso donador de electrones y el Oxígeno molecular es un potente aceptor de electrones. De hecho el flujo neto de electrones desde el NADH hasta el Oxígeno resulta en lasíntesis de ATP. La fosforilación oxidativa es una serie de eventos químicos que llevan a la síntesis de ATP:


ADP + Pi ----------------------------- síntesis del ATP
fosforilación del ADP


II. OBJETIVOS

Identificar cofactor, enzima y sustrato.
Identificar las diferentes tipos reacciones.





III. MATERIALES

Tubos de ensayo
Mortero
arena
PipetaPropipeta
Buffer fosfato pH 7.0
Azul de metileno
Aceite mineral
Cobayo: musculo, hígado, corazón.
Agua destilada
Centrifugadora

IV. PROCEDIMIENTO

A) Obtención del cofactor NAD+

1. Pusimos a calentar 20 ml de agua destilada en un beaker hasta ebullición.
2. Sacrificamos y desangramos un cobayo.
3. Extrajimos los músculos de la pata y luego le agregamos 2g de arena y trituramos hasta obtener una pastafina.
4. Centrifugamos a 3500 rpm por 5 min.
5. Separamos el sobrante que contiene los cofactores en un tubo de ensayo y lo rotulamos con la letra C poniéndolo en un recipiente con hielo.

B) Obtención de la enzima lactato deshidrogenasa y componentes de la cadena

1. Del cobayo sacrificado extrajimos la mitad del hígado y homogenizamos en un portero con 2 g de arena.
2. Añadimos 6 ml de suelofisiológico (NaCl al 0,9%) y continuamos moliéndolo hasta obtener una masa fina.
3. Le echamos 6 ml más de suero y luego lo llevamos a centrifugar a 3500 por 5 min.
4. Separamos el sobrenadante que contiene la enzima a un tubo de ensayo y lo dejamos por 15 min en temperatura ambiente.
5. Conservamos la preparación en un recipiente con hielo, rotulado con una letra E.
6. Para utilizar la enzima E,diluimos con buffer fosfato pH 7.2 razón de 1 ml de E por cada 4 ml de buffer.
7. Con 2 ml sin diluir de E, realice una centrifugación diferencial a fin de conocer componentes del núcleo y mitocondrias.








8. Agitamos los tubos y añadimos 1 ml de aceite mineral.
9. Incubamos a 37°C durante 30 min.

Experimento 2: acción de inhibidores enzimáticos en la respiración
1. Separamos el corazón de uncobayo, lo cortamos y colocamos en un mortero con 2 g de arena y 5 ml de buffer fosfato pH 7.0
2. Homogenizamos y de nuevo repetimos el proceso anterior hasta tener una pasta fina.
3. Llevamos a centrifugación separando el sobrenadante y sumergiéndolo en hielo. Rotularlo como PC








4. Agitar los tubos y añadir 1 ml de aceite mineral
5. Incubar 37°C durante 30 min.





V. RESULTADOS

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