Informe ensayos

SEMINARIO III
INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA E INDIRECTA
MICROSCOPIA CONFOCAL
Tatiana Urtubia Salazar
Magíster en Ciencias mención Salud Animal

Objetivos:

Introducción
La inmunofluorescencia(IF) o técnica de anticuerpos fluorescentes es un procedimiento especializado que se basa en la reacción antígeno-anticuerpo hecha visible por la incorporación de un colorante fluorescente.
En 1941Coons intentó conjugar los anticuerpos con colorantes fluorescentes y en 1942 publicó la primera aplicación de esta técnica inmunológica.
La microscopia de IF es una técnica inmunohistoquímicaque consiste en conjugar colorantes fluorescentes (isotiocianato de fluoresceína, rodamina B de lisamina o ácido 1-dimetilaminonaftalen-5-sulfónico, entre otros) con anticuerpos o antígenos, exponiendodespués este conjugado a los anticuerpos o antígenos correspondientes en cortes de tejidos, frotis de microorganismos o de células, o cultivo de tejidos en capa única. Cuando la reacción es positiva yse expone a la luz ultravioleta se producirá fluorescencia observable bajo el microscopio de IF.
La IF puede ser usada sobre tejidos, líneas celulares cultivadas o células individuales y en algunoscasos puede ser usada para analizar la distribución de proteínas, glicanos y moléculas biológicas o no biológicas pequeñas. Existen diferentes microscopios diseñados para lograr observar lasreacciones positivas de IF sin embargo el más usado y conocido es el microscopio confocal.

Fluorescencia
Una molécula fluorescente es aquella capaz de captar radiación electromagnética con una longitud deonda determinada y emitir otra radiación electromagnética con otra longitud de onda diferente, normalmente dentro del espectro de la luz visible. Los fluoróforos se utilizan como marcadores para ladetección de otras moléculas tisulares, normalmente mediante la técnica de IF.
En el proceso, una molécula absorbe un fotón de alta energía, el cual es emitido como un fotón de baja energía (mayor...