Informe Microscopia Ii

UNIVERSIDAD ANDRES BELLO
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

LABORATORIO DE BIOLOGÍA CELULAR BIO-131
GUÍA Nº 3: MICROSCOPIA II

INTRODUCCIÓN Cuando las ondas de luz son emitidas desde una fuente coherente (como un láser), las ondas están en fase, o sea, los picos y los valles de las ondas coinciden. Esto tiene el efecto de reforzar las ondas y crear unamayor amplitud, que percibimos como un aumento en el brillo. Sin embargo, cuando las ondas de luz están fuera de la fase, se interfieren entre sí reduciendo la amplitud y el brillo. Cuando las ondas de luz pasan de una sustancia a otra, se curvan o se difractan y sus trayectorias cambian ligeramente. Esta difracción altera las relaciones de la fase de las ondas, dando como resultado cantidadesvariables de interferencia. La cantidad de interferencia producida cuando la luz atraviesa las diferentes estructuras de una célula no es grande, y el contraste que se detecta es escaso cuando la célula se observa con un microscopio óptico común, lo cual por su puesto es la razón por la cual las células deben teñirse. Sin embargo, en los microscopios de contraste de fase y de interferencia diferencial,sistemas ópticos especialmente diseñados intensifican la escasa interferencia y proporcionan un mayor contraste. La resolución de estos microscopios es limitada, como ocurre en un microscopio óptico común, pero suministran una perspectiva diferente de la célula viva, mostrando aspectos difíciles de detectar en otro sistema. Otra técnica usada frecuentemente en las células vivas es la microscopiade campo oscuro. El haz de iluminación llega a la muestra desde el costado y los sistemas de lentes detectan la luz reflejada por el espécimen, que aparece como un objeto brillante contra un fondo oscuro. Los rasgos de las células que son visibles en estas fotomicrografías, a menudo adquieren un gran relieve en las de campo oscuro. Actualmente, ocurre un rápido progreso en el uso de otras técnicasmicroscópicas; por ejemplo, acoplando cámaras de televisión a los microscopios ópticos es posible efectuar las observaciones en la pantalla y grabarlas en una cinta de video. Ajustando los controles, como puede hacerse en un aparato de televisión, el “ruido” de fondo puede reducirse, mejorar el contraste e intensificar aspectos particulares. Las técnicas de televisión aplicadas al estudio de lacélula viva están en su infancia, pero están generando gran excitación, dado que revelan procesos no vistos previamente dentro de la célula. Los constantes avances en la microscopía han permitido su utilización en muchos aspectos de la biología celular, fisiología e incluso en patología humana, uno de éstos es la determinación del número de células en suspensión. Por ejemplo, en hematología humana notan sólo es importante conocer el tipo y características de las células presentes en la sangre, sino que además el número de cada una de ellas presentes en un volumen determinado (por ej.: 1 ml o 1 mm3). Objetivo del práctico: En este laboratorio el objetivo principal es que el estudiante observe preparaciones frescas de sangre generando un campo oscuro; conozca la técnica de recuento de glóbulosrojos a través de la cámara de Neubauer y determine el tamaño celular en un frotis sanguíneo permanente.

Recuento de glóbulos rojos en cámara de Neubauer: La cámara de Neubauer (Fig. 1) es una cámara de contaje adaptada al microscopio de campo claro o al de contraste de fases. Se trata de un portaobjetos con dos depresiones en el centro, en el fondo de las cuales se han marcado con la ayudade un diamante una cuadrícula como la que se ve en la imagen. Cada cuadrícula es un cuadrado de 3 x 3 mm, con una separación entre dos líneas consecutivas de 0.25 mm para los cuadrados externos (L), y de 0.20 mm el cuadrado interno. Así pues, las áreas sombreadas corresponden a 1 milímetro cuadrado cada una (Fig. 2). La depresión central del cubreobjetos está hundida 0.1 mm respecto a la...