Informe organización subcelular

Universidad Andrés Bello
Facultad de Ecología y Recursos Naturales
Laboratorio de Biología Celular
Profesores: Cristian Madrid








TRABAJO PRÁCTICO N°4:
Organización Subcelular.
BIO131













Autores:





Introducción:
A medida que pasan los años, los avances científicos han desarrollado técnicas de estudio para analizar de manera más exactay precisa los tejidos, organismos y principalmente a la célula. Las técnicas de microscopía, fraccionamiento celular, tinción, entre otras, han permitido reconocer distintos componentes celulares esenciales para la estructura y funcionamiento celular, es por esto que se sabe que la célula es la unidad mas pequeña que se considera viva, que cada una de sus estructuras tiene una función determinaday que le dan características únicas.
La microcopia óptica es una técnica que permite observar objetos que no vemos a simple vista porque son demasiado pequeños, el microscopio utiliza lentes ópticas, o compuesto, ya que consta de varias lentes, permitiendo aumentar la imagen hasta unas 2.000 veces (dependiendo de la calidad del instrumento) (1).
La tinción es otra técnica usada paradistinguir entre tipos diferentes de células o para revelar la presencia de determinados constituyentes celulares, tales como flagelos, esporas, cápsulas, paredes celulares, centros de actividad respiratoria, etc. Es muy necesario e importante aplicar tinción debido a la falta de contraste entre la célula y el medio que la rodea (2).
El fraccionamiento celular, es un método de estudio cuyo objetivoprincipal es aislar y examinar fracciones celulares microscópicamente. Para esto se debe homogenizar la célula, es decir, preparar la célula para el fraccionamiento celular, y deben mantenerse en frío los organelos y enzimas durante el procedimiento para mantener  la integridad de estos. Luego el homogenizado,  es centrifugado repetidas veces  a altas velocidades, sedimentándolo progresivamente enpequeñas partículas, obteniendo de esta manera diversos compuestos celulares por centrifugación a diferentes velocidades (3). Con esta técnica se pueden obtener y separar núcleos, mitocondrias, peroxisomas, lisosomas, retículos endoplasmáticos, entre otros.
Estas son las técnicas que se utilizaron en el laboratorio, cuyos procedimientos, análisis y resultados de los experimentos serán expuestos enel informe.
Objetivo: Aprender y entender la técnica de fraccionamiento subcelular, y centrifugación para el rompimiento de la célula y la separación de los organelos.

Materiales y métodos:
En la actividad nº1 primero, se deben poner 4 tubos falcon en hielo para que se enfríen, luego, para homogenizar la muestra, se debe introducir un trozo de hígado de pollo con buffer en un vasoprecipitado, se muele en un ultra turrax y los trozos grandes deben ser retirado vertiendo el resultado molido sobre un embudo con una gasa sobrepuesta, de esta manera el líquido quedará en otro vaso precipitado. El líquido debe ser introducido en uno de los tubos falcon que estaban en hielo, luego debe ser puesto en la centrifuga a 2500 RPM por 10 minutos, al sacarlo quedará un pellet y un sobrenadante,este último debe ser sacado con una pipeta muy cuidadosamente sin tocar el pellet y luego ser puesto en un 2º tubo falcon. Lo que queda en el 1º tubo debe ser puesto en hielo inmediatamente después de sacar el sobrenadante, este 2º tubo falcon debe ser puesto en la centrifuga a 6000RPM por 20 minutos, al sacarlo también habrá un pellet y un sobrenadante, este último debe ser puesto en un 3º tubofalcon y dejado en hielo. Terminado esto, el pellet 1 que está en el 1º tubo falcon debe ser resuspendido en 1ml de NaCl 0.9%, después sacar una gota y colocarla en un portaobjetos y colocar un cubre objeto para ser observado al microscopio, luego sacar otra gota y colocarla en otro portaobjetos y agregar una gota de azul de tripán y observar al microscopio. El pellet 2 que está en el 2º tubo...