Organización Subcelular

Introducción
Las células como unidad básica de la vida, presentan una organización fundamental que optimiza su funcionalidad y su vida celular, la organización sub celular se refiere a la distribución de los orgánulos presentes en la membrana plasmática de la célula. Existen diferentes orgánulos que cumplen funciones específicas, de acuerdo a su estructura y condiciones generales, como núcleo,mitocondria, cloroplastos, retículo endoplasmático, aparato de Golgi, etc. Por definición, todas las células eucariontes tienen un núcleo, que está rodeado por dos membranas que forman la envoltura nuclear, el núcleo contiene las moléculas de DNA (1). Otro de los orgánulos más visibles del citoplasma son las mitocondrias, tienen forma de salchicha o de gusano, y se hallan rodeados por dos membranasseparadas (1).
Para el correcto análisis de estas unidades subcelulares, se utilizan distintos tipos de Fraccionamiento celular, que es el aislamiento y separación de los principales orgánulos de la célula en función del tamaño y de la densidad (2). De los variados tipos de fraccionamiento celular en este práctico usaremos el fraccionamiento por medio de centrifugación. Este método consiste enla separación subcelular colocando el homogeneizado (ruptura de la membrana plasmática, por medio de procedimientos mecánicos suaves, como ondas sonoras, detergente suave o mecánicamente) en un tubo de ensayo y se rota a altas velocidades en una centrífuga o en una ultracentrífuga (Instrumento de rotación programada) produciendo enormes fuerzas de gravedad en el tubo de ensayo(1), luego yacentrifugado, el tubo de ensayo con el homogeneizado presenta un sedimento precipitado producto de los componentes más densos que se denomina Pellet y un sobrenadante que serían los componentes más densos que no precipitaron con la fuerza programada en la centrífuga. Durante el fraccionamiento celular es importante analizar el grado de pureza de las fracciones obtenidas. Mediante el análisis de moléculascaracterísticas, conocidas como marcadores (3).

Objetivo:
Comprender el fundamento de la técnica de fraccionamiento subcelular por medio del rompimiento de la célula y la separación de los organelos mediante un campo gravitacional.

Discusión
Se nos entregó un Pellet (P1) correspondiente a núcleos, para verificar la efectiva presencia de núcleos en el Pellet producto de la centrifugaciónse analizó al microscopio con y sin tinción de Azul de tripan. En la muestra sin tinción se observó la presencia de ADN, sin embargo, era poco visible y se identificaban con dificultad las estructuras. En las muestras con tinción de Azul de tripan, se pudo observar con mucho más detalle la presencia de ADN que se tiño de un color azul intenso por sobre el resto de las estructuras nucleícas, enesta observación el ADN actuó como molécula marcadora indicando la presencia de núcleo en la muestra, ya que este organelo específicamente contiene moléculas de ADN, que se expresan como codificador de la información celular.
Se observó en el microscopio muestras de la fracción mitocondrial con y sin tinción, el fin de la observación era comprobar la presencia de núcleos en la muestra, esperandoque sea negativa. La muestra sin tinción de la fracción mitocondrial observamos presencia de componentes irregulares poco identificables, a diferencia de la fracción nuclear sin tinción observada anteriormente. En la muestra con tinción azul de tripan de la fracción mitocondrial observamos que se tiñeron algunos componentes que no se pudieron identificar, las mitocondrias presentes no se pudieronidentificar en ninguna de las muestras, ya que usamos microscopio óptico, y la luz que atraviesa la mitocondria no permite su visualización, a diferencia en un microscopio electrónico, que usa haz de electrones, se puede identificar la presencia y estructura de las mitocondrias.
Para el análisis de mitocondrias:
Se prepararon 4 tubos de ensayo en frío, para así congelar la actividad celular, y...