Informe

Universidad Andrés Bello
Facultad de Ciencias de la Salud
Departamento de Ciencias Biológicas
Laboratorio de Biología Celular BIO 035



Guía trabajo práctico N° 5
“ORGANIZACIÓN SUBCELULAR”






















INTRODUCCIÓN
El estudio de la célula ha ido avanzando conforme ha avanzado la tecnología, desde la observación desde un microscopio rudimentario hastamicroscopios electrónicos que nos permiten distinguir los más nítidos detalles de las más ínfimas estructuras celulares, ya sean de la célula compacta o de alguno de sus organelos ya separado de esta. ¿Cómo se puede llevar al microscopio un componente de la célula sin estar dentro de esta? ¿Cuáles son los métodos de separación? La célula puede ser separada de sus componentes, es decir,fraccionada hasta dejar solo el citosol como resultado final, utilizando el triturado previo del tejido. Este proceso, el fraccionamiento, “es una técnica bioquímica utilizada para separar los distintos orgánulos y componentes celulares para su estudio. La técnica se inicia con la homogeneización. El tejido se tritura en un homogeneizador de manera que las células se comprimen y se libera su contenido. Loque luego se hace con ese extracto es someterlo a diferentes centrifugaciones a diferentes velocidades y tiempos, de manera que obtenemos fracciones enriquecidas de los distintos orgánulos.”(Web1).

De las centrifugaciones se obtiene un resultado compuesto por un pellet y un sobrenadante. El pellet puede contener núcleos, mitocondrias, lisosomas, etc., y estos son llevados al microscopio paraanalizar el funcionamiento de los mismos, mediante tinciones que reaccionan para saber a grandes rasgos si nuestra muestra continúa con vida o no. Ahora, remontándonos un poco a lo que es el inicio de este práctico, todo este proceso de fraccionamiento celular se realiza a partir de tejido hepático de rata, de una especie de rata de laboratorio llamada Sprangue Dawley, que “se trata de una rataalbina de uso extensivo en el campo de la biomedicina.”(Web2)

En este informe nos encargaremos de responder a las interrogantes ¿Cómo podemos observar muestras de órganos ya sacados del organismo sin que estas se desnaturalicen de inmediato? ¿Qué son las fosfolipasas y las proteasas, qué función cumplen? ¿Cómo reaccionan los colorantes con las muestras?

Hipótesis: Nuestra hipótesisconcuerda en que el fraccionamiento celular, nos permite observar aparte de la estructura de un organelo, también su funcionamiento y su ubicación dentro de la célula, por lo tanto se aplican conocimientos de reacciones, síntesis etc.
















Objetivos:

Conocer los distintos procesos que existen para llegar a una determinada fracción celular. Conocer y aprender el proceso dehomogenización el que es ocupado en el fraccionamiento celular.

Consiste en que el estudiante reconozca los diferentes componentes de la célula a través del fraccionamiento celular (Fracción nuclear y Fracción mitocondrial)

Conocer los métodos de centrifugación utilizados en el proceso mencionado anteriormente.

Además de evaluar con marcadores moleculares los componentes de la célulastravés del reconocimiento de las mitocondrias para determinar las diferencias con los demás organelos.


Materiales y métodos:
Primera Actividad:
Previamente a la realización de los procesos experimentales, se tomo un hígado de rata de laboratorio, el que se puso en un vaso precipitado y le agrego una concentración de 20 ml de buffer unas 4 veces para eliminar todo residuo de sangre y sesometió a él homogeneizador, que trituró el tejido hasta formar una solución homogénea, esta solución se filtro a través de una gasa y un embudo que desembocaba a otro vaso precipitado, el cual se puso en hielo. A cada grupo se le entrego 1ml de homogeneizado que fue depositado el tubo Falcón
Luego, en la experimentación, el tubo Falcón de polipropileno se debió mantener en hielo, ya que contenía...