Inquietud..

Las enzimas son proteínas que actúan como catalizadores facilitando las transformaciones químicas de varias sustancias tanto dentro de las células como fuera de ellas. La sustancia sobre la cual actúa la enzima se llama sustrato y las producidas a partir de éste por acción enzimática son los productos. Las enzimas exhiben especificidad de sustrato, esto es, cada enzima actúa sobre unasustancia formando productos específicos.
Algunos términos importantes relacionados con la actividad enzimática son los siguientes:
COFACTORES: Componente químico adicional al de las secuencias de las cadenas polipetídicas. Pueden ser inorgánicos u orgánicos: Cu, Fe, K, Mn, Zn, Mn, etc.
COENZIMA: son cofactores de complejos orgánicos . Algunas enzimas requieren tanto coenzima como uno omás iones metálicos para poder cumplir su función.
GRUPO PROSTÉTICO: es una coenzima o ión metálico que es unido covalentemente a la enzima.
HOLOENZIMA: es la enzima completa, activa catalíticamente, unida a su coenzima y/o iones metálicos.
La Función principal de una enzima es hacer descender la energía de activación que necesita una molécula para poder intervenir en una reacción,permitiendo que las reacciones ocurran en los organismos a velocidades eficientes a condiciones normales de pH, temperatura y concentración.
En esta práctica examinaremos la acción in vitro de algunas enzimas y el efecto que sobre esta acción tienen factores como temperatura y pH.

OBJETIVOS
Analizar, in vitro, los procesos básicos de la actividad enzimática.
Determinar el efecto ocasionado porlos factores temperatura y pH sobre los mecanismos de acción enzimática.

MATERIALES Y REACTIVOS


Papa | Leche |
Huevo Hígado | Estufa |
Baños de María Capilares de vidrio | Gasa Fósforos o encendedor |
Solución de lugol | Papel filtro |
Solución de Benedict | Pipetas 1 Ml |
Solución de almidón 1% | Tubos de ensayo |
Buffer fosfato 0.1M pH 3 | Vasos de precipitado 100 ml|
Buffer fosfato 0.1M pH 7 | Morteros |
Buffer fosfato 0.1 M pH 10 | Cuchillas |
Jugo gástrico artificial | Agua destilada |
Solución de extracto de cebada | Cajas de petri |
Solución de pancreatina 2% | Peróxido de hidrógeno |
Sales biliares | Solución de pepsina 7.5% |
Solución de tornasol 1 % | |

METODOLOGÍA

La catalasa químicamente conocida como oxidorreductasa deperóxido de hidrógeno, se encuentra ampliamente distribuída en tejidos animales y vegetales hallándose a elevadas concentraciones en células hepáticas, y sanguíneas. La catalasa actúa sobre el peróxido de hidrógeno H202, conocida comúnmente como agua oxigenada y comercialmente como Dioxogen. La enzima es muy específica y no actúa sobre ningún otro sustrato natural distinto al H2O2. La reaccióncatalizada por esta enzima es la siguiente:

H2O2 H20 + ½ 02

El peróxido de hidrógeno es el producto de varias oxidaciones celulares y la catalasa prevendría su acumulación.

OBTENCIÓN DE UNA SOLUCIÓN DE CATALASA

Tome un pedazo de papa de forma cúbica de 3 cm de lado y retire la cubierta externa de este tubérculo. En un mortero adicionando5 ml de agua destilada proceda a macerar la papa y adicione más agua hasta completar 50 ml y obtener un macerado homogéneo. Filtre el homogenizado y coléctelo en un vaso de precipitado de 100 ml.

Tome dos tubos de ensayo y adicione en cada uno de ellos lo siguiente:
Tubo 1 : 1 ml de H202 3%, + 1 ml de solución de catalasa
Tubo 2: 1 ml de agua destilada y 1 ml de solución decatalasa.

El tubo número 2 sirve como control negativo en este experimento. Como un indicativo de la reacción enzimática tomaremos la producción de burbujas (VER REACCIÓN). Anote sus observaciones.
Tome ahora un tubo de ensayo y adicione 1 ml de la solución de catalasa, sométalo al calor hasta el punto de ebullición, adicione 1 ml de H2O2 3%. Anote sus resultados.

Mediante el mismo...