KCN
Páginas: 6 (1274 palabras)
Publicado: 22 de marzo de 2015
UNIDAD II: PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN Y DIFERENCIACIÓN POR METABOISMO (PRUEBAS BIOQUÍMICAS).
PRUEBA DEL CIANURO DE POTASIO
PRINCIPIO: determinar la capacidad de un organismo de vivir y reproducirse en un medio que contenga cianuro de potasio.
FUNDAMENTO BIOQUÌMICO
La respiración aeróbica es un proceso biológico de oxidación – reducción que produce energía y por medio del cual un sustratoorgánico es oxidado, el mismo trasfiere electrones e iones hidrógeno por medio del sistema de transporte de electrones, al aceptor de hidrógeno final, el oxígeno molecular. El proceso produce agua o peróxido de hidrógeno, según la especie bacteriana y su sistema enzimático.
La mayoría de los organismos aeróbicos poseen la enzima citocromooxidasa que los vuelve capaces de utilizar el oxigeno como unaceptor de hidrogeno final para reducir el oxigeno molecular en peróxido de hidrogeno, el ultimo enlace de la cadena de la respiración aeróbica. La mayoría de las especies bacterianas aeróbicas producen también la enzima catalasa que vuelve a descomponer el peróxido de hidrogeno, dado que su acumulación e toxica.
El papel del sistema citocromooxidasa en la respiración aeróbica es importante puestoque es sabido que en la mayoría de los organismos que contienen alguna parte el sistema citocromo, el ion cianuro (CN) puede inhibir la respiración. El cianuro es un inhibidor de la citocromooxidasa.
Muchas de las enzimas que se encuentran en una célula bacteriana requieren para su actividad un ion metálico. El cianuro (CN) tiene afinidad con el ion metálico formando un complejo. Las enzimas quecontienen hierro son inhibidas por el cianuro: este encierra el hierro inactivando a la enzima. La citocromooxidasa es un pigmento de metal pesado: la citocromo ferrosa, con la cual se combina el cianuro, interrumpe el sistema de transporte de electrones y provoca el cese de la respiración. La inhibición del cianuro es de tipo no competitivo (irreversible).
CARACTERISTICAS GENERALES
MEDIOS EMPLEADOSA) Caldo KCN. 1, 3, 4, 7
1. Caldo KCN básico, pH: 7,6.
a) ingredientes.
1. peptona 3 g
2. cloruro de sodio (NaCl) 5 g
3. fosfato de potasio monobásico (KH2PO4) (ahh.) 0,225 g
4. fosfato dibásico de sodio (Na2HPO4·2H2O) 5,64 g
5. agua destilada 1000 ml
b) Productos que existen en el comercio
1. Difco: caldo de KCN básico.
2. BBL: caldo de KCN de Moller básico.
c) Método de preparación. KCNbásico.
1. Separar el medio básico en dos alícuotas, una parte que contenga KCN, y la otra para el control.
2. Pesar exactamente las cantidades siguiendo las indicaciones del prospecto.
3. Rehidratar con agua destilada o desmineralizada.
4. Calentar suavemente hasta disolución.
d) Método de esterilización, KCN básico.
1. Autoclave.
2. 121° C. 15 libras. 15 min.
e) Enfriar el medio básico estérilhasta 20° C. 3, 4
1. Puede refrigerarse hasta que se enfrié.
2. No agregar el KCN hasta que el medio este completamente frio.
2. Cianuro de potasio, 0,5 % 6
a) ingredientes.
1. preparar en un frasco con tapa o rosca estéril.
2. Cianuro de potasio (KCN) 0,5 g
3. Agua destilada estéril, fría 100 ml
b) No pipetear KCN con la boca, trabajar bajo campana de seguridad.
3. A una porción del mediobásico frio agregar una solución de KCN al 0,5 %
a) Utilizando una pipeta de bulbo.
b) Mezclar bien.
c) Proporción: 1,5 ml/ 100 ml.
La concentración final del medio de KCN con peptona tamponado es de 1: 13.000. 6, 17
d) Asépticamente distribuir en tubos.
1. Tubos con tapa a rosca de 5 ml, estériles. 3
2. Aproximadamente 1 ml/ tubo. 3
3. Mayor facilidad de manipular los tubos con tapa a rosca.
4. Ajustarlas tapas.
4. Distribuir en tubos el medio básico de control, sin agregar KCN.
a) Puede distribuirse 1 ml / tubo antes de someterse al autoclave.
b) Distribuir 1 ml / tubo estéril, después de someter al autoclave.
c) cuando este frio, ajustar las tapas.
5. Refrigerar para su conservación (4° C). el medio de KCN puede conservarse por lo menos 30 días a 4° C sin que se deteriore el cianuro o...
PRUEBA DEL CIANURO DE POTASIO
PRINCIPIO: determinar la capacidad de un organismo de vivir y reproducirse en un medio que contenga cianuro de potasio.
FUNDAMENTO BIOQUÌMICO
La respiración aeróbica es un proceso biológico de oxidación – reducción que produce energía y por medio del cual un sustratoorgánico es oxidado, el mismo trasfiere electrones e iones hidrógeno por medio del sistema de transporte de electrones, al aceptor de hidrógeno final, el oxígeno molecular. El proceso produce agua o peróxido de hidrógeno, según la especie bacteriana y su sistema enzimático.
La mayoría de los organismos aeróbicos poseen la enzima citocromooxidasa que los vuelve capaces de utilizar el oxigeno como unaceptor de hidrogeno final para reducir el oxigeno molecular en peróxido de hidrogeno, el ultimo enlace de la cadena de la respiración aeróbica. La mayoría de las especies bacterianas aeróbicas producen también la enzima catalasa que vuelve a descomponer el peróxido de hidrogeno, dado que su acumulación e toxica.
El papel del sistema citocromooxidasa en la respiración aeróbica es importante puestoque es sabido que en la mayoría de los organismos que contienen alguna parte el sistema citocromo, el ion cianuro (CN) puede inhibir la respiración. El cianuro es un inhibidor de la citocromooxidasa.
Muchas de las enzimas que se encuentran en una célula bacteriana requieren para su actividad un ion metálico. El cianuro (CN) tiene afinidad con el ion metálico formando un complejo. Las enzimas quecontienen hierro son inhibidas por el cianuro: este encierra el hierro inactivando a la enzima. La citocromooxidasa es un pigmento de metal pesado: la citocromo ferrosa, con la cual se combina el cianuro, interrumpe el sistema de transporte de electrones y provoca el cese de la respiración. La inhibición del cianuro es de tipo no competitivo (irreversible).
CARACTERISTICAS GENERALES
MEDIOS EMPLEADOSA) Caldo KCN. 1, 3, 4, 7
1. Caldo KCN básico, pH: 7,6.
a) ingredientes.
1. peptona 3 g
2. cloruro de sodio (NaCl) 5 g
3. fosfato de potasio monobásico (KH2PO4) (ahh.) 0,225 g
4. fosfato dibásico de sodio (Na2HPO4·2H2O) 5,64 g
5. agua destilada 1000 ml
b) Productos que existen en el comercio
1. Difco: caldo de KCN básico.
2. BBL: caldo de KCN de Moller básico.
c) Método de preparación. KCNbásico.
1. Separar el medio básico en dos alícuotas, una parte que contenga KCN, y la otra para el control.
2. Pesar exactamente las cantidades siguiendo las indicaciones del prospecto.
3. Rehidratar con agua destilada o desmineralizada.
4. Calentar suavemente hasta disolución.
d) Método de esterilización, KCN básico.
1. Autoclave.
2. 121° C. 15 libras. 15 min.
e) Enfriar el medio básico estérilhasta 20° C. 3, 4
1. Puede refrigerarse hasta que se enfrié.
2. No agregar el KCN hasta que el medio este completamente frio.
2. Cianuro de potasio, 0,5 % 6
a) ingredientes.
1. preparar en un frasco con tapa o rosca estéril.
2. Cianuro de potasio (KCN) 0,5 g
3. Agua destilada estéril, fría 100 ml
b) No pipetear KCN con la boca, trabajar bajo campana de seguridad.
3. A una porción del mediobásico frio agregar una solución de KCN al 0,5 %
a) Utilizando una pipeta de bulbo.
b) Mezclar bien.
c) Proporción: 1,5 ml/ 100 ml.
La concentración final del medio de KCN con peptona tamponado es de 1: 13.000. 6, 17
d) Asépticamente distribuir en tubos.
1. Tubos con tapa a rosca de 5 ml, estériles. 3
2. Aproximadamente 1 ml/ tubo. 3
3. Mayor facilidad de manipular los tubos con tapa a rosca.
4. Ajustarlas tapas.
4. Distribuir en tubos el medio básico de control, sin agregar KCN.
a) Puede distribuirse 1 ml / tubo antes de someterse al autoclave.
b) Distribuir 1 ml / tubo estéril, después de someter al autoclave.
c) cuando este frio, ajustar las tapas.
5. Refrigerar para su conservación (4° C). el medio de KCN puede conservarse por lo menos 30 días a 4° C sin que se deteriore el cianuro o...
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