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LABORATORIO N°06
DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE UN PREPARADO ENZIMÁTICO PURO

I. INTRODUCCIÓN

Como es bien sabido, las enzimas son proteína. Polímeros de residuos amino acídicos unidos mediante enlaces peptídicos, que tiene la función de ser catalizadores de las reacciones químicas del metabolismo celular. La producción de enzimas, de actividades específicas,es seguida por una purificación y una estandarización del producto. En la formulación del producto se agregan diversos excipientes (otras proteínas y azúcares, por ejemplo). Por lo que un preparado enzimático comercial no es 100% puro .De manera de cuantificar la enzima presente en una formulación comercial se realizan determinaciones de su actividad enzimática y del contenido de proteínas.
II.OBJETIVOS

• Desarrollar una curva patrón de calibración
• Determinar la actividad enzimática en unidades usc (Unidad Street Close)

III. FUNDAMENTO TEÓRICO
CINÉTICA DE REACCIONES QUÍMICAS
La reacción química tiene dos características de importancia: la posición de equilibrio (estabilidad de la concentración de productos y reactivos) y la velocidad de reacción (las reacciones tienen porobjeto determinar el mecanismo y la velocidad con que interaccionan las moléculas bajo determinadas condiciones).
La velocidad de una reacción química puede medirse como la velocidad de formación de uno o más de su productos o bien la velocidad de utilización de sus reactivos. Intuitivamente podemos suponer que al aumentar la concentración de los reactivos la probabilidad de interacción de losmismos aumenta conjuntamente con la velocidad que procede tal reacción. Ambas variables (velocidad de reacción y concentración de los reactivos) son directamente proporcionales, así que matemáticamente debe existir un valor constante, de esta manera podemos escribir:

vr = k. [reactivos]n
(Velocidad de reacción) = (constante) . (Concentración de reactivos)n
El valor del exponente n es el orden dela reacción. Así si n = 1, estamos en presencia de una reacción de primer orden donde la velocidad es proporcional a la reacción de un solo reactivo. vr = k. [A]
Análogamente, cuando n = 2, la velocidad es proporcional al producto de las concentraciones de dos reactivos o al cuadrado de la concentración de uno solo. Este tipo de reacciones reciben el nombre de segundo orden. vr = k. [A] [B] =k [A] 2
La importancia de determinar el orden de una reacción química radica en que a partir de ese parámetro puede obtenerse información sobre el mecanismo molecular en que opera.
VELOCIDAD DE REACCIÓN Y EQUILIBRIO
En estado de equilibrio químico las velocidades de reacciones directa e inversa son exactamente iguales. Considerando una reacción de primer orden:
k1 [A] = k – 1 [B]Este principio nos permite llegar fácilmente a una reacción entre las constantes de velocidad y de equilibrio:
EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA VELOCIDAD DE REACCIÓN: ENERGÍA DE ACTIVACIÓN
Las velocidades de reacción son generalmente sensibles a la temperatura. En el caso de las reacciones biomoleculares, un aumento de 10º C incrementa su velocidad entre 1,5 y 5 veces. Para explicar este hecho sepostuló que al acrecentar la temperatura aumenta la fracción de moléculas capaces de tener una energía suficiente para alcanzar un “estado activado” que luego se transforme en producto de la reacción por formación o ruptura de enlaces químicos.
Se admite que las únicas moléculas que reaccionan son aquellas que al chocar llevan consigo una energía mayor que un cierto valor mínimo. A este valor deenergía necesaria se lo denomina energía de activación y es un factor de suma importancia para determinar la magnitud de la velocidad de reacción.
CATALIZADORES
Una reacción química tendrá lugar si se debe superar el valor de la energía de activación. Una vez vencida esa barrera el sistema evoluciona de forma tal que llegará al estado final de la reacción. La velocidad de reacción podría...