La Vida

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Guía de Laboratorio Kinesiología

UNIVERSIDAD DE ANTOFAGASTA
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
DEPARTAMENTO BIOMEDICO
UNIDAD DE BIOQUÍMICA

GUIA DE LABORATORIO BIOQUIMICA
Carrera: Kinesiología
Segundo Semestre de 2012

Profesores de Laboratorio:
- Janetti Signorelli
- Daniela Mac Doo

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Guía de Laboratorio Kinesiología

CONTENIDOS

Pag

PARTE I : PRINCIPIOS Y TÉCNICASDE LA FOTOMETRIA…………………………………………........ 3

Espectro de absorción…….....………………………………………………………………................................ 6

LABORATORIO N° 1. Determinación del espectro de absorción de un compuesto coloreado…………….............. 8

Leyes de fotometría……………………………………………………............................................................10

LABORATORIO N° 2. Determinación cuantitativa deproteínas (Método de Biuret)………………………….........15

PARTE II: ENZIMOLOGÍA

Aspectos básicos para la medición de la actividad enzimática……………………….....................................17

LABORATORIO N° 3: Efecto del pH sobre la actividad de la Fosfatasa ácida………………………………………20

LABORATORIO N° 4: Efecto de la Tº sobre la actividad de la Fosfatasa ácida…………………………………… 23

LABORATORIO N° 5: Efectode la concentración de sustrato sobre la actividad de Fosfatasa ácida......................25

Guía elaborada por: Hector Olivares
Janetti Signorelli

Guía de Laboratorio Kinesiología

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PRINCIPIOS Y TECNICAS DE LA FOTOMETRIA

Introducción
Muchos de los experimentos bioquímicos incluyen la cuantificación de un compuesto o un grupo de
compuesto que forman parte de una mezcla ensolución. Quizás la técnica mas usada para determinar la concentración
de dichos compuestos es la espectrofotometría.
La espectrofotometría (medición de la luz) es un método instrumental analítico que nos permite cuantificar y
caracterizar un compuesto en solución. Básicamente se está haciendo uso de las propiedades de los átomos y moléculas
para absorber o emitir la energía en una de las muchasáreas del espectro electromagnético total, específicamente en
aquella parte denominada LUZ la que consta de:
- Luz Ultravioleta (UV)
- Luz Visible
- Luz Infrarro ja (IR)
Las radiaciones que componen el espectro de luz visible, contienen la energía capaz de excitar a la retina y
producir el fenómeno de la visión (en colores en humano). Al referirnos al espectro electromagnético debemos pensaren términos de unidades de energía, porque realmente de eso se trata. Se puede pensar que la energía se propaga en el
espacio en forma de onda, como la onda que se produce al dejar caer una piedra en un estanque de agua quieta, se
forman concentricamente varias crestas con valles entre si. Las ondas de energía electromagnética se constituyen así, de
modo que cuando más próximas estén lascrestas, mayor será la energía. Una de las medida que caracteriza la energía
electromagnética es la longitud de onda (λ ), o sea la distancia que existe entre una y otra cresta de la onda (figura 1).
Existe una relación inversamente proporcional entre la longitud de onda y su contenido de energía. Los valores de
longitudes de onda varían desde 1 amstrong o bien 0,1 nanometro en los Rayos Gamma a másde 25 centímetros en las
Ondas de Radio. Convencionalmente se usa el nm (nanometro) como unidad de medida, donde 1 nm = 10-9 m.

Longitud de onda

λ

λ
Longitud de onda

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Figura 1. Movimiento ondulatorio de las radiaciones electromagnéticas.

La Luz en sí es una pequeña parte del espectro de radiaciones electromagnéticas (figura 2), yespecíficamente las técnicas
fotométricas utilizan aquellas longitudes de onda del espectro de luz ultravioleta y luz visible.

Figura 2 . Rango de longitudes de onda del espectro de radiaciones electromagnéticas. Se destaca la región de luz
visible en la que se indica además los valores energéticos de los rangos más importantes.
Las moléculas que componen la materia interactuan con la radiación...