Laboratorio Coloración de Cápsula bacteriana

LABORATORIO COLORACIÓN DE LA CÁPSULA BACTERIANA

REPORTE DE RESULTADOS
Algunas bacterias están rodeadas por una cubierta viscosa y pegajosa, secretada por ellas mismas, firmemente adherida a la pared e impermeable, que forma una capa o envoltura alrededor de la célula llamada capsula.
Para su observación, se requiere una técnica especial ya que su índice de refracción es similar al delmedio. Se recurre a técnicas como la de Anthony que utiliza el cristal violeta como colorante primario y el sulfato de cobre como contratinte para enjuagar el cristal violeta. También puede visualizarse a través de la tinción negativa.
Durante la práctica se utilizaron ambos métodos para la visualización de la cápsula bacteriana y se observaron las muestras tomadas al microscopio con el objetivo de100x. Estos fueron los resultados:

ANALISIS DE RESULTADOS
Se tomaron tres muestras para los dos métodos, las dos primeras provenían de un medio de cultivo líquido y la n3 de un medio de cultivo sólido.
Metodo de Anthony
En la muestra nº1 se observó que habían células bacterianas con forma de baston, la mayoría individuales y unas pocas en agrupaciones de pares. Estaban teñidas de un colorvioleta y a su alrededor había un halo ligeramente traslúcido.
Tinción Negativa
En este método se utiliza un colorante acido y debido a su carga negativa, se tiñe el medio más no las células bacterianas.
En la muestra nº2 se observó que habían células bacterianas con forma bacilar y no formaban agrupaciones. Se observó un fondo oscuro y una zona blanca que rodeaba las células.
En la muestra nº3se observó el fondo oscuro y, en blanco se observó agrupaciones irregulares (como en racimos de uvas) de células bacterianas con forma circular.
Todo el procedimiento se llevó a cabo cuidadosamente y siguiendo las instrucciones dadas por la profesora, particularmente, el método de Anthony fue necesario repetirlo ya que la primera vez que se hizo, no se pudo observar claramente el halo que debeformarse en la coloración de bacterias capsuladas ya que todo el medio se observó de un color violeta oscuro, esto debido a que el lavado con el sulfato de cobre no fue efectivo ya que este había sido utilizado por varios compañeros del laboratorio y no funcionó muy bien como contratinte.




RESPUESTAS CUESTIONARIO “COLORACION DE CAPSULA BACTERIANA”
1 ¿Cuál de los métodos aplicados es máspráctico y por qué? La mejor técnica para visualizar cápsulas se basa en realizar una tinción negativa utilizando tinta china o nigrosina, ya que los colorantes no penetran en la célula sino que ennegrecen el medio. Las células se observan brillantes, sin teñir y se aprecia una zona clara alrededor de las mismas. En ocasiones se utiliza un colorante posterior para resaltar las células. El método deAnthony no se considera el mejor método ya que es más difícil observar la capsula ya que el halo (capsula) se ve translúcido.
2 Diferenciar entre una bacteria capsulada y una no capsulada.
La diferencia radica en habilidades, capacidades o ventajas que da la capsula a la bacteria que la posee (cabe aclarar que la presencia o ausencia de la capsula está regulada geneticamente aunque los medios decultivo y ciertas condiciones ambientales favorecen su formación) . Por ejemplo:
• Si no hay agua en el medio donde se encuentra, una bacteria capsulada esta protegida de la desecación debido a que la capsula retiene agua, una bateria sin capsula si no tiene agua en el medio puede no sobrevivir
• Una bacteria capsulada está protegida del ataque de anticuerpos del hospedador y de la fagocitosisya que la capsula impide que se lleve a cabo este proceso, una bacteria sin capsula es reconocida facilmente por leucocitos y globulos blancos que la digieren.
• Lo anterior aumenta la virulencia de las bacterias encapsuladas a diferencia de una no encapsulada.
• La capsula en una bacteria dificulta la difusion de sustancias hidrófobas y electronegativas, como algunos antibióticos y...