Laboratorio De Biología Celular

JARDIN CELULAR
Francisco Rivas, Ricardo Aguilera, Catalina Rivera, Boris Lavanderos. Universidad de Santiago de Chile, Facultad de Química y Biología, Laboratorio de Biología Celular
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La matriz extracelular (MEC) es el medio principal para la vida, comunicación y formación de tejidos. Debido a su variedad de componentes, entre los másabundantes el colágeno, presentan muchas características y funciones para las células que la habitan. Exponiendo a las células de la sepa HeLa (sepa inmortal de alta proliferación) a diferentes concentraciones de colágeno estudiaremos e interpretaremos la proliferación de estas. Para esto, se realizará un conteo de células en cámaras Neubaüer al microscopio óptico, y luego estos resultados se extrapolanen los cultivos con las diferentes concentraciones de colágeno tipo 1 (0 mg/mL, 0.1 mg/mL y 1 mg/mL) . Obteniendo la cantidad de células que proliferaron en los cultivos con colágeno se podrá determinar cuan necesaria es esta molécula para el crecimiento de células HeLa
INTRODUCCIÓN
La matriz extracelular es la red estructural que rodea y sostiene a las células con una amplia variedad defibras, como el colágeno y la elastina, por nombrar algunas, y una gran cantidad de proteoglicanos, glucosaminoglucanos y glicoproteínas (1). Cada célula presente en la matriz extracelular (MEC) secreta moléculas de esta, y dependiendo de las concentraciones en que se encuentren las moléculas, la MEC cumple diferentes funciones. Entre estas funciones, encontramos la de adhesión celula-matriz y demigración celular, comandada por la molécula fibronectina (2). El colágeno y la laminina, otros componentes de la matriz extracelular, son muy característicos de la lamina basal, un tipo de MEC que rodea al entramado del epitelio. (2) El colágeno, de los cuales hay por lo menos 19 variantes, es capaz de formar fibras y redes. Sus características más notables son su resistencia a la tracción yflexibilidad (3).
Cabe mencionar a modo explicativo ciertos conceptos para introducir este práctico, como es el caso de la cepa de células “HeLa”, la cual corresponde a células cancerosas de cérvix uterino. Lo característico de esta sepa, aparte de su nombre, que proviene del nombre de la paciente de la cual se obtuvieron estas células (Henrietta Lacks), es su gran capacidad de proliferar a una velocidadabismante (4). Esta propiedad es la que hace que sea una de las sepas más usadas para el estudio de cultivos celulares.
OBJETIVO
* Estudiar la capacidad de una línea celular de epitelio, derivada de cáncer cérvico-uterino, como lo son las células HeLa de adherirse a una superficie de vidrio recubierta con diferentes concentraciones de colágeno I purificado extraído de cola de rata.MATERIALES & MÉTODOS
Los materiales utilizados en éste laboratorio fueron los siguientes: medio DME, cepa de células HeLa, Suero fetal de Bovino (SFB), micropipetas de diferentes medidas, Campana estéril, solución salina reguladora (PBS), Buffer PBS-EDTA (Ac.etilendiaminotetraacético), tubos Eppendorf. Centrifuga, tinción Azul de tripan, microscopio óptico, placas de cultivo, Hematoxilina, cámarade hemocitómetro (Neubaüer) y colágeno purificado.
Al interior de una campana de flujo laminar se abrió la botella de cultivo para retirar el medio de cultivo de la botella con una micropipeta. Luego se lavo el cultivo 2 veces con 2 mL de PBS estéril, y se incubo por 2 minutos con 2 mL de PBS-EDTA (10 mM) estéril. Se golpeo suavemente la botella para despegar las células de esta, se disgregaronlas células con una micropipeta y se depositaron 250 µL de la suspensión de células en un tubo eppendorf. Luego estos fueron centrifugados por 5 minutos a 1000 rpm para luego descartar el sobrenadante, y el pellet obtenido se suspendió en 1000 µL de medio DME suplementado con 5% de SFB estéril.
Se preparo un tubo eppendorf con 20 µL de suspensión de células y 20 µL de azul de tripán y se dejo...